葡萄在我國(guó)眾多經(jīng)濟(jì)作物中占據(jù)至關(guān)重要的地位,其栽培面積和產(chǎn)量均位于世界前列,但我國(guó)部分種植地區(qū)不利的生態(tài)環(huán)境給葡萄生產(chǎn)帶來了很多問題,其中土壤鹽漬化是主要的限制因素。選育耐鹽葡萄砧木進(jìn)行嫁接栽培,是解決這一問題的有效途徑之一。與常規(guī)育種相比,通過基因工程培育耐鹽葡萄砧木具有省時(shí)、高效的特點(diǎn),因此,篩選、鑒定耐鹽基因并研究其功能和作用機(jī)理具有重要意義。促分裂原活化蛋白激酶（MAPKs）途徑在植物抵御多種不良環(huán)境過程中發(fā)揮著重要作用。我們前期研究中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)高度響應(yīng)鹽脅迫基因VvMAPKK3,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)VvMAPK9與其互作且受到鹽脅迫誘導(dǎo),但其響應(yīng)鹽脅迫的分子機(jī)制目前還不清楚。因此,本研究以本團(tuán)隊(duì)選育的耐鹽性較強(qiáng)的葡萄砧木A35（‘左山一’×SO4）為試材,克隆得到VvMAPK9基因,并對(duì)該基因的序列特征、表達(dá)模式和抗鹽功能進(jìn)行了分析。主要研究結(jié)果如下:（1）VvMAPK9基因的生物信息學(xué)分析。該基因的開放閱讀框全長(zhǎng)為1128 bp,編碼含有375個(gè)氨基酸殘基的多肽,預(yù)測(cè)分子量為42.615 kDa,等電點(diǎn)為6.24。亞細(xì)胞定位分析發(fā)現(xiàn)VvMAPK9定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)。系統(tǒng)進(jìn)化分析... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

葡萄砧木VvMAPK9基因的PCR擴(kuò)增電泳圖

black.ThephosphorylatedTEYmotifandtheCDdomainaremarkedbyredframe.Theabbreviationofthespeciesname:Vv,Vitisvinifera;At,Arabidopsisthaliana;Bn,Brassicanapus;Zm,Zeamays;Os,oryzasativa.3.2VvMAPK9在葡萄砧木中的表達(dá)特征分析3.2.1VvMAPK9基因在葡萄砧木不同組織中的表達(dá)特征分析為了研究VvMAPK9在葡萄中的轉(zhuǎn)錄方式，我們利用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)了VvMAPK9在葡萄砧木A35各組織中的表達(dá)水平。結(jié)果表明，VvMAPK9在不同器官中的表達(dá)存在差異，主要在葡萄幼葉、成熟葉和根中表達(dá)，在葉柄和莖中的表達(dá)量相對(duì)較低（圖3-3）。圖3-3VvMAPK9在葡萄不同組織中的表達(dá)Fig.3-3TheexpressionofVvMAPK9invariousorgansofgrape3.2.2多種非生物脅迫下VvMAPK9基因表達(dá)模式分析大量研究發(fā)現(xiàn)植物MAPK參與多種脅迫抗性，為了研究VvMAPK9基因能否響應(yīng)非生物脅迫，我們檢測(cè)了不同非生物脅迫處理對(duì)VvMAPK9基因轉(zhuǎn)錄水平的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)四種非生物脅迫均可使VvMAPK9基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)出現(xiàn)不同程度的上調(diào)（圖3-4）。鹽處理葡萄砧木VvMAPK9的表達(dá)量顯著上調(diào)，轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平在12h達(dá)到頂峰，是未處理的7.32倍；干旱處理后VvMAPK9的表達(dá)量呈先上升后下降再上升的趨勢(shì)，并在6h達(dá)到高峰，是未處理的4.84倍；高溫處理后VvMAPK9的表達(dá)量在4h達(dá)到高峰，是未處理的1.66倍，其余時(shí)間均為本底水平；低溫處理后VvMAPK9的表達(dá)量上調(diào)較小，最

葡萄VvMAPK9在鹽脅迫響應(yīng)中的功能研究30高上調(diào)1.36倍。上述結(jié)果說明VvMAPK9基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)受到多種非生物脅迫的調(diào)節(jié)，因此，推測(cè)其參與多種非生物脅迫。另外VvMAPK9基因還受ABA誘導(dǎo)。圖3-4不同非生物脅迫和ABA處理下葡萄砧木VvMAPK9的表達(dá)模式Fig.3-4ExpressionpatternofVvMAPK9inGrapestockA35underdifferentabioticstressesandABAtreatment3.3VvMAPK9蛋白的亞細(xì)胞定位構(gòu)建35S-VvMAPK9-GFP載體（3-5A），運(yùn)用農(nóng)桿菌GV3101介導(dǎo)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化法將其轉(zhuǎn)入煙草葉片的表皮細(xì)胞。撕取葉片下表皮制成玻片后放在激光共聚焦顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)VvMAPK9-GFP融合蛋白在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中都產(chǎn)生了綠色熒光（圖3-5B），這說明VvMAPK9主要定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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