2012年以來,四川各地南方鲇和溝鲇的養(yǎng)殖場常爆發(fā)一種以體表出現(xiàn)褪色斑,背部、腹部肌肉出現(xiàn)明顯的長方狀潰瘍灶,臀鰭與尾鰭基部出血為特征的傳染病。2012-2014年間,從四川各鲇魚養(yǎng)殖區(qū)自然感染發(fā)病的南方鲇和溝鲇體內(nèi)分離到4株（SCCF03-SCCF06）G-弧形,極生單鞭毛短桿菌。在TSA平板于28℃培養(yǎng)48h,形成表面光滑,邊緣整齊,微隆起,乳白色的圓形菌落,在鑒別培養(yǎng)基TCBS上則形成綠色菌落。在光學(xué)顯微鏡下,4分離菌呈G-短桿菌,菌體稍彎,呈弧形或逗點狀；電鏡下可見菌體極生單鞭毛；生理生化特性與弧菌屬細菌極為相似。根據(jù)分離菌株的形態(tài)學(xué)和生理生化特性初步判定其為弧菌（Vibrio sp）; 16SrDNA與gyrB序列分析表明,4分離株16SrDNA序列（KC503057sKC503059、KJ001822、KF907127）與GenBank中V.cholerae 16S rDNA序列同源性最高；而gyrB序列（KC503058、KC503060、KC503054、KF998569）與V. mimicus gyrB序列同源性最高。在以分離菌16SrDNA序列及其GenBank中同... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1. V.mimicus的微生物學(xué)特征
        1.1 分類地位
        1.2 形態(tài)與大小
        1.3 培養(yǎng)特性
        1.4 生物化學(xué)特性
        1.5 抵抗力及藥物敏感性試驗
        1.6 V.mimicus的感染范圍及癥狀
    2. 致病機制及相關(guān)毒力因子
        2.1 粘附素
        2.2 腸毒素
        2.3 溶血素
        2.4 其它致病因子
    3. 診斷與防治
    4. 南方鲇的養(yǎng)殖及常見疾病
        4.1 南方鲇的生物學(xué)特性
        4.2 南方鲇的常見疾病
            4.2.1 細菌性疾病
            4.2.2 真菌性疾病
            4.2.3 寄生蟲性疾病
    5. 目的及意義
第二章 擬態(tài)弧菌的分離鑒定
    1. 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
    2. 方法
        2.1 病原菌的分離
        2.2 人工感染試驗
            2.2.1 V.mimicus的培養(yǎng)和計數(shù)
            2.2.2 試驗動物的分組及感染方式
        2.3 分離株的鑒定
            2.3.1 分離菌的形態(tài)學(xué)觀察
            2.3.2 生理生化特性鑒定
            2.3.3 16S rRNA和gyrB基因鑒定
            2.3.4 16S rRNA及gyrB基因序列測定及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建
            2.3.5 基于弧菌系統(tǒng)發(fā)育標志性鑒別基因dnaJ的雙重PCR檢測
        2.4 南方鲇擬態(tài)弧菌自然感染的病理學(xué)觀察
            2.4.1 臨床癥狀及病理解剖觀察
            2.4.2 組織病理學(xué)觀察
                2.4.2.1 取材
                2.4.2.2 石蠟切片的制備
                2.4.2.3 HE染色
        2.5 藥敏性檢測
    3. 結(jié)果
        3.1 病原菌的分離與人工感染試驗
        3.2 分離株的表型特征
            3.2.1 細菌的形態(tài)
            3.2.2 生理生化特性
        3.3 16S rRNA基因和gyrB基因PCR擴增與系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析
        3.4 雙重PCR檢測
        3.5 南方鲇擬態(tài)弧菌自然感染的病理學(xué)觀察
            3.5.1 臨床癥狀及病理解剖觀察
            3.5.2 組織病理學(xué)變化
        3.6 藥物敏感性試驗
    4. 討論
        4.1 V.mimicus的鑒定
        4.2 V.mimicus感染的臨床癥狀辨析
        4.3 V.mimicus感染的病理損傷特點
        4.4 V.mimicus感染的防治
第三章 鲇源擬態(tài)弧菌的生物學(xué)特性研究
    1. 材料
        1.1 菌株
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
    2. 方法
        2.1 擬態(tài)弧菌基因組DNA提取
        2.2 擬態(tài)弧菌毒力基因的檢測
            2.2.1 毒力基因引物設(shè)計
            2.2.2 各毒力基因PCR擴增程序及條件
        2.3 擬態(tài)弧菌溶血素基因（vmh）的克隆與生物信息學(xué)分析
            2.3.1 引物設(shè)計
            2.3.2 vmh基因的PCR擴增
                2.3.2.1 vmh基因的PCR擴增體系
                2.3.2.2 vmh基因的PCR程序
            2.3.3 vmh基因的T-載體克隆與鑒定
                2.3.3.1 目的DNA片段的回收
                2.3.3.2 感受態(tài)細胞DH5α的制備
                2.3.3.3 連接
                2.3.3.4 重組克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞DH5α
                2.3.3.5 重組克隆質(zhì)粒的鑒定
        2.4 擬態(tài)弧菌溶血素基因（vmh）的生物信息學(xué)分析
    3. 結(jié)果
        3.1 毒力基因的檢測
        3.2 vmh基因的克隆
            3.2.1 vmh基因的PCR擴增
            3.2.2 PCR產(chǎn)物的單、雙酶切鑒定
            3.2.3 重組質(zhì)粒pMD19-T-vmh的PCR鑒定
        3.3 vmh基因的生物信息學(xué)分析
            3.3.1 vmh基因核酸序列的開放閱讀狂ORF分析
            3.3.2 vmh基因編碼的氨基酸序列的理化特性分析
            3.3.3 vmh基因編碼的氨基酸序列的結(jié)構(gòu)域預(yù)測
            3.3.4 vmh基因編碼的氨基酸序列的多序列比對
            3.3.5 vmh基因編碼的氨基酸序列的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
            3.3.6 vmh基因編碼的氨基酸序列的柔性區(qū)域預(yù)測
            3.3.7 vnh基因編碼的氨基酸序列的表面可及性預(yù)測
            3.3.8 vmh基因編碼的氨基酸序列的疏水性預(yù)測
            3.3.9 vnh基因編碼的氨基酸序列的信號肽預(yù)測
            3.3.10 vnh基因編碼的氨基酸序列的跨膜區(qū)預(yù)測
            3.3.11 vmh基因編碼的氨基酸序列的抗原表位預(yù)測
            3.3.12 vmh基因編碼的氨基酸翻譯后磷酸化和糖基化位點預(yù)測
    4. 討論
        4.1 V.mimicus的毒力基因
        4.2 V.mimicus vmh基因的分子特性分析
        4.3 V.mimicus vmh基因編碼的氨基酸序列的抗原表位分析
    5. 結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：2965041