木材褐腐菌可以分泌纖維素酶和半纖維素酶,在自然界纖維素循環(huán)中起到重要作用。樺剝管菌是一種典型的褐腐菌,但對(duì)樺剝管菌降解木材的研究較少。為了探討樺剝管菌在降解木材纖維素過(guò)程中相關(guān)酶和蛋白表達(dá)量變化以及調(diào)控方式,對(duì)不同木屑（白樺、云杉）誘導(dǎo)培養(yǎng)的樺剝管菌的纖維素酶活性和胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行比較研究,并對(duì)胞外分泌蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行初探。分別在23℃和28℃培養(yǎng)樺剝管菌,每24 h測(cè)量一次菌落直徑。在23℃培養(yǎng)下平均生長(zhǎng)速度為8.9 mm/d,28℃平均生長(zhǎng)速度為13 mm/d。結(jié)果表明樺剝管菌更適合在28℃下培養(yǎng)。分別以白樺木屑、云杉木屑和麥麩為誘導(dǎo)物,以不加木屑的馬鈴薯液體培養(yǎng)基為對(duì)照,測(cè)定樺剝管菌在12d內(nèi)的纖維素酶活變化。總體而言,內(nèi)切纖維素酶最大,外切纖維素酶活次之,β-葡萄糖苷酶活性最小。內(nèi)切纖維素酶活在前9d都表現(xiàn)出上升趨勢(shì),而外切纖維素酶培養(yǎng)初期酶活很高,隨著時(shí)間增長(zhǎng)酶活水平開(kāi)始下降,在培養(yǎng)9d后酶活又開(kāi)始增長(zhǎng)。β-葡萄糖苷酶分泌時(shí)間較晚,在第12d才明顯檢測(cè)到酶活。通過(guò)蛋白質(zhì)組雙向電泳和Image Master分析,檢測(cè)樺剝管菌在不同樹(shù)種木屑誘導(dǎo)下的菌體胞內(nèi)蛋白質(zhì)組變化。與對(duì)照組（... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－４胞外分泌蛋白??Ｆｉｇ．?３－４?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ａｎｄ?ｉｄｅｎｔｉ円ｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ??

維素酶活的測(cè)定結(jié)果及枠剝管菌的生長(zhǎng)速度規(guī)律，選擇提取培養(yǎng)第１５?ｄ及胞外分泌蛋白，由于真菌多糖含量較高，造成在等點(diǎn)聚焦過(guò)程中蛋白質(zhì)ＳＤＳ聚丙帰酷胺凝膠電泳中出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，因此在蛋白沉淀過(guò)程中加入１附多糖，提取效果較好。在一向等點(diǎn)聚焦過(guò)程中，胞內(nèi)蛋白種類(lèi)比較豐富，??｜ａｇ蛋白最后得到的蛋白圖譜效果很好，適用于Ｉｍａｇｅ?Ｍａｓｔｅｒ軟件分析蛋白胞外分泌蛋白種類(lèi)很少，上樣４００＾３得到的蛋白圖譜比較清晰。??沮中差向異構(gòu)酶、蘋(píng)果酸脫氨酶、磯酸蹄醇丙麗酸蛋白稱(chēng)酸轉(zhuǎn)移酶、ＮＩＭ關(guān)蛋白、ＧＴＰ結(jié)合蛋白表達(dá)量上調(diào)，這幾種酶參與到能量和物質(zhì)代謝、氮訊、蛋白質(zhì)合成、有絲分裂等過(guò)程，而轉(zhuǎn)酵醇酶、熱休克蛋白表達(dá)量下調(diào)，??及到糖代謝和刺激響應(yīng)等過(guò)程。云杉組中ＳＡＭ依賴(lài)性甲基轉(zhuǎn)移酶、無(wú)機(jī)基轉(zhuǎn)移酶、３－微管蛋白和４０Ｓ－核糖體蛋白表這量上調(diào)，這些酶參與到物轉(zhuǎn)導(dǎo)、染色體表達(dá)調(diào)控、脂類(lèi)代謝、蛋白合成修飾等方面。而蛋氨酸氨基調(diào)，該酶在組織修復(fù)和蛋白質(zhì)降解的過(guò)程中起到關(guān)鍵作用。在木屑誘導(dǎo)組，吸此

?枠剝管菌接種到馬鈴曹液體培養(yǎng)基１５?ｄ后，進(jìn)行胞外蛋白提取，將得到的蛋白質(zhì)樣??品進(jìn)行雙向電泳。等點(diǎn)聚焦選用ＰＨ３－１０范圍的ＩＰＧ膠條，第二向分離選用１２．５％的??犯Ｓ－ＰＡ畑凝膠。如圖３－３所示，蛋白上樣量均為４００帖。??＾?：３�！航裕�??，通Ｌ??＇丐‘?＊、－某?ｆ?叛＾４?毫友一．二．?＊�。В�?３?；?，盛占??圖３－４胞外分泌蛋白??Ｆｉｇ．?３－４?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ａｎｄ?ｉｄｅｎｔｉ円ｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ??３－４．２．１胞外分泌蛋白質(zhì)組分析??共選取２４個(gè)點(diǎn)進(jìn)行ＭＡＬＤＩ?ＴＯＦ／ＴＯＦ質(zhì)譜鑒定，利用ＧＰＳ?Ｅｘｐｌｏｒｅ軟件進(jìn)行分??化ＭＡＳＣＯＴ檢索ＮＣＢＩ化蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：2934490