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水稻不育系康豐A稻瘟病抗性的遺傳分析和基因定位

發(fā)布時(shí)間:2017-03-31 02:24

  本文關(guān)鍵詞:水稻不育系康豐A稻瘟病抗性的遺傳分析和基因定位,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


【摘要】:稻瘟病是全世界范圍內(nèi)分布最廣、危害程度最大的稻作病害,選擇抗性品種用于研究抗瘟基因的遺傳規(guī)律和開(kāi)展抗性基因的定位與克隆具有十分重要的意義,發(fā)現(xiàn)、利用和聚合稻瘟病抗性基因?qū)⑹情_(kāi)展稻瘟病抗性育種的工作重點(diǎn)。本研究以三明市農(nóng)科院選育的抗稻瘟病三系不育系康豐A為研究材料,采用康豐B(康豐A的同型保持系)、感病品種麗江新團(tuán)黑谷(LTH),以及以康豐B為母本,麗江新團(tuán)黑谷為父本配制雜交組合獲得F1后經(jīng)自交構(gòu)建的F2群體為遺傳群體材料,利用初步篩選的12JL-606-1、12JL-907-1、12YT-兩優(yōu)2186-1、13YT-本地冬-1、13TN06-5和12JN-兩優(yōu)084-3等6個(gè)稻瘟病菌株進(jìn)行親本抗性分離試驗(yàn),最終確定12JL-907-1為試驗(yàn)菌株對(duì)遺傳群體進(jìn)行接種、記載觀察、統(tǒng)計(jì)與遺傳分析;采用稻瘟病菌株12JL-907-1侵染F2遺傳群體材料,獲得極端感病單株,與抗病親本康豐B單株、感病親本LTH單株和抗病F2單株共同組成的稻瘟病抗性基因定位群體,利用隱性群體分析法(RCA)結(jié)合分離群體分析法(BSA),采用Mapmaker/3.0軟件,對(duì)康豐A(B)的抗病基因進(jìn)行SSR連鎖性分析與位點(diǎn)預(yù)測(cè)。主要研究結(jié)果如下:1、康豐A(B)對(duì)供試的6個(gè)菌株均表現(xiàn)出極端抗病反應(yīng)(HR),說(shuō)明康豐A(B)對(duì)福建省水稻主要產(chǎn)區(qū)稻瘟病群體具有良好的抗性。利用菌株12JL-907-1對(duì)1960株F2代單株進(jìn)行噴霧接種,出現(xiàn)3:1的抗感分離比(1492R:468S),表明康豐A(B)對(duì)菌株12JL-907-1的抗性由一對(duì)獨(dú)立遺傳的細(xì)胞核顯性基因控制,暫時(shí)命名為Pi-kf2(t)。2、通過(guò)篩選均勻分布在水稻1-12號(hào)染色體上的554對(duì)SSR引物對(duì)康豐A(B)和麗江新團(tuán)黑谷(LTH)的DNA進(jìn)行SSR多態(tài)性引物篩選,發(fā)現(xiàn)對(duì)親本PCR擴(kuò)增產(chǎn)物具有多態(tài)性的引物58對(duì),所占比例為10.5%。再通過(guò)F2群體抗、感基因池多態(tài)性篩選,結(jié)果發(fā)現(xiàn)共有6個(gè)SSR標(biāo)記引物對(duì)抗、感基因池PCR擴(kuò)增產(chǎn)物表現(xiàn)出多態(tài)性。進(jìn)一步利用利用隱性群體分析法(RCA)結(jié)合分離群體分析法(BSA),對(duì)康豐A(B)的抗病基因進(jìn)行SSR連鎖性分析,以對(duì)菌株JL-907-1極端感病的344株極端感病F2單株為作圖群體,采用Mapmaker3.0/MapDraw 軟件,對(duì)緊密連鎖的SSR標(biāo)記和抗稻瘟病基因進(jìn)行遺傳連鎖分析并作圖,將康豐A稻瘟病抗性基因Pi-kf2(t)初步定位在第6號(hào)染色體,處于第6號(hào)染色體中上部,具體位于SSR引物RM7572和RM19730之間,Pi-kf2(t)與RM7572之間的相對(duì)遺傳距離為1.3cM,與RM19730之間的相對(duì)遺傳距離為5.7cM。3、通過(guò)比對(duì)Orygenesdb和Gramene等數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)合國(guó)家水稻數(shù)據(jù)中心(http://www.ricedata.cn/index.htm)稻瘟病抗性基因位置的報(bào)道,對(duì)6號(hào)染色體上已定位的稻瘟病抗病位點(diǎn)的物理位置進(jìn)行分析,并與Pi-kf2(t)進(jìn)行比對(duì),結(jié)果表明,兩個(gè)SSR標(biāo)記引物(RM7572-RM19730)之間尚未有已定位到的抗稻瘟病基因。因此,康豐A(B)所含稻瘟病抗性基因Pi-kf2(t)有可能是一個(gè)新的抗稻瘟病基因。
【關(guān)鍵詞】:水稻 稻瘟病 抗性基因 遺傳分析 定位
【學(xué)位授予單位】:福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類(lèi)號(hào)】:S511
【目錄】:
  • 中文摘要7-9
  • Abstract9-10
  • 引言10-12
  • 第一章 文獻(xiàn)綜述12-24
  • 1. 稻瘟病12-13
  • 1.1 稻瘟病的發(fā)生與危害12
  • 1.2 稻瘟病的致病機(jī)理12-13
  • 2. 水稻稻瘟病抗性的鑒定與遺傳13-15
  • 2.1 水稻稻瘟病抗性類(lèi)型13
  • 2.2 水稻稻瘟病抗性的鑒定13-14
  • 2.3 水稻稻瘟病抗性的遺傳14-15
  • 3. 水稻稻瘟病抗性基因的定位和克隆15-22
  • 3.1 遺傳載體的構(gòu)建15-16
  • 3.2 分子標(biāo)記在水稻基因定位與克隆研究中的應(yīng)用16-18
  • 3.2.1 主要分子標(biāo)記技術(shù)的原理和特點(diǎn)17
  • 3.2.2 SSR標(biāo)記在水稻基因定位與克隆研究中的應(yīng)用17-18
  • 3.3 已定位的水稻稻瘟病抗性基因18-21
  • 3.4 水稻稻瘟病抗性基因的克隆21-22
  • 4. 水稻稻瘟病抗性育種22-23
  • 4.1 雜交育種22
  • 4.2 分子標(biāo)記輔助選擇育種22-23
  • 4.3 轉(zhuǎn)基因育種23
  • 5. 本研究的目的和意義23-24
  • 第二章 康豐A稻瘟病抗性基因的遺傳分析24-30
  • 1. 材料與方法24-26
  • 1.1 試驗(yàn)材料24
  • 1.1.1 水稻材料24
  • 1.1.2 供試菌株24
  • 1.2 試驗(yàn)方法24-26
  • 1.2.1 菌株的培養(yǎng)和菌液的制備25
  • 1.2.2 預(yù)備試驗(yàn)25
  • 1.2.3 播種育苗及接種25
  • 1.2.4 病斑調(diào)查與記載25-26
  • 1.2.5 稻瘟病抗性基因的遺傳學(xué)分析26
  • 2. 結(jié)果與分析26-28
  • 2.1 供試稻瘟病菌株產(chǎn)孢分析26
  • 2.2 康豐A對(duì)稻瘟病菌株的抗感反應(yīng)26-27
  • 2.3 F_2群體對(duì)稻瘟病菌株12JL-907-1的抗性遺傳分析27-28
  • 3. 討論28-30
  • 第三章 康豐A抗稻瘟病基因的定位30-38
  • 1. 材料與方法30-32
  • 1.1 試驗(yàn)材料30
  • 1.1.1 水稻材料30
  • 1.1.2 稻瘟病菌株30
  • 1.1.3 SSR標(biāo)記引物30
  • 1.2 試驗(yàn)方法30-32
  • 1.2.1 康豐A(B)抗稻瘟病基因定位群體及抗感基因池的構(gòu)建30-31
  • 1.2.2 水稻DNA的提取31
  • 1.2.3 PCR反應(yīng)體系(13μL)的建立31
  • 1.2.4 SSR擴(kuò)增反應(yīng)程序31-32
  • 1.2.5 PCR產(chǎn)物的電泳檢測(cè)32
  • 1.3 SSR標(biāo)記引物與抗病基因的連鎖分析32
  • 2. 結(jié)果與分析32-36
  • 2.1 SSR標(biāo)記的多態(tài)性篩選32-33
  • 2.2 康豐A(B)抗稻瘟病基因的定位33-35
  • 2.3 F_2分離群體遺傳圖譜的構(gòu)建35
  • 2.4 康豐A(B)稻瘟病抗性基因Pi-kf2(t)的預(yù)測(cè)35-36
  • 3. 討論36-38
  • 第四章 全文結(jié)論38-39
  • 參考文獻(xiàn)39-48
  • 致謝48-49
  • 作者簡(jiǎn)介49
  • 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文49

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