本文關鍵詞：山西省奶牛乳腺炎病原及診斷技術的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本試驗通過對養(yǎng)牛戶和規(guī)�；B(yǎng)牛場的1500頭奶牛的調研,分析了山西省奶牛乳腺炎的發(fā)病情況以及引起該病的主要病原菌；采用PCR等分子生物學手段,檢測研究了引起山西省奶牛乳腺炎的主要病原菌,將多病原檢測的PCR檢測條件予以優(yōu)化篩選,對多重PCR情況進行確定,在此基礎上,研究了這些微生物的特異性和敏感性。結果表明：1、調查發(fā)現(xiàn)了與引起山西省奶牛乳腺炎相關的病原菌9種159株細菌,經鑒定證明的這些微生物約79%是大腸桿菌、鏈球菌及葡萄球菌。對上述微生物進行藥敏試驗，結果顯示,上述三種微生物對廣譜抗生素多西環(huán)素(Doxycycline),以及潔霉素、左氧氟沙星、頭孢曲松鈉等抗菌藥物呈中度或高度敏感,而對氨芐西林、鏈霉素或丁胺卡那霉素顯示無敏感性或低敏感。2、多重PCR檢測結果表明,用于擴增菌株引物的最佳濃度是：大腸桿菌的引物終濃度為0.75～1.0μmol/L,金黃色葡萄球菌引物終濃度為1.25～2.0μmol/L,無乳鏈球菌的引物終濃度為1.5～1.75μ/L;最適退火溫度是：大腸桿菌菌株為46.3～53.3℃，金黃色葡萄球菌菌株為55.3～57.6℃,無乳鏈球菌菌株為49.4～55.3℃；擴增dNTP最適終濃度是：大腸桿菌為0.075～0.3mmol/L,金黃色葡萄球為0.15mmol/L,無乳鏈球菌為0.1～0.2mmol/L。分別將大腸桿菌標準菌株、金黃色葡萄球菌菌株以及無乳鏈球菌菌株用其自身引物優(yōu)化后的條件進行PCR單重擴增,結果依次顯示在544 bp.439bp、162bp處見有與設計一致的核酸擴增片段。3、對于大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和無乳鏈球菌分別用PCR檢測法與細菌培養(yǎng)法方法鑒定出現(xiàn)顯著差異,由此可見,對上述細菌檢測的靈敏度PCR法優(yōu)于細菌培養(yǎng)法,說明PCR更適于于奶牛場及質量檢查監(jiān)督單位的實際需要。綜上,大腸桿菌、葡萄球菌和鏈球菌是造成山西省規(guī)�；膛黾梆B(yǎng)牛戶奶牛乳腺炎的主要病原,這些微生物對多西環(huán)素(Doxycycline)、潔霉素、頭孢曲松鈉、左氧氟沙星敏感；PCR檢測和細菌培養(yǎng)法均可用于金黃色葡萄球菌的鑒定,且PCR法更為靈敏、更適合奶牛場及乳品質量的檢測監(jiān)控。
【關鍵詞】：奶牛 乳腺炎 病原菌 分離鑒定 多重PCR
【學位授予單位】：山西農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S858.23
【目錄】：

• 摘要8-9
• 前言9-10
• 第一部分 文獻綜述10-16
• 1 國內外研究現(xiàn)狀10-12
• 1.1 奶牛乳腺炎的研究進展10-11
• 1.2 聚合酶鏈式反應11-12
• 2 研究目的12
• 3 主要研究內容12-13
• 4 技術路線13
• 5 主要解決的關鍵技術與創(chuàng)新點13-14
• 5.1 關鍵技術13
• 5.2 存在問題和改進意見13-14
• 5.3 創(chuàng)新點14
• 6 取得的社會經濟效益及推廣應用前景14-16
• 第二部分 試驗部分16-39
• 試驗一 山西省奶牛乳腺炎病原菌的分離及其生物學特性的鑒定16-22
• 1 材料與方法16-17
• 1.1 試驗動物16
• 1.2 主要試劑16
• 1.2.1 培養(yǎng)基16
• 1.2.2 藥敏紙片16
• 1.3 試驗方法16-17
• 2 試驗結果17-20
• 2.1 山西省奶牛乳腺炎致病菌的分離鑒定17-18
• 2.2 藥敏試驗結果18-20
• 3 討論20-21
• 3.1 山西省奶牛場奶牛乳腺炎致病菌的分離鑒定結果分析20
• 3.2 奶牛乳腺炎的療效分析20-21
• 4 小結21-22
• 試驗二 乳腺炎致病菌的分子生物學鑒定22-31
• 1 材料與方法22-25
• 1.1 試驗菌株22
• 1.2 主要儀器及試劑22
• 1.2.1 主要儀器22
• 1.2.2 主要試劑22
• 1.3 試驗方法22-25
• 1.3.1 病原體DNA提取22-23
• 1.3.2 引物的設計與合成23-24
• 1.3.3 PCR反應24
• 1.3.4 三種致病菌單重PCR的特異性試驗24
• 1.3.5 三種致病菌單重PCR方法靈敏性的確定24
• 1.3.6 PCR擴增及條件優(yōu)化24-25
• 2 試驗結果25-29
• 2.1 PCR擴增退火溫度的優(yōu)化結果25-26
• 2.2 PCR擴增引物濃度的優(yōu)化結果26-27
• 2.3 PCR擴增DNTP濃度的優(yōu)化結果27-28
• 2.4 PCR擴增特異性結果28
• 2.5 PCR擴增敏感性結果28-29
• 3 討論29-30
• 3.1 乳樣中不同病原菌的多重PCR檢測結果29-30
• 3.2 PCR引物的設計及片段擴增30
• 4 小結30-31
• 試驗三 多重PCR檢測與細菌培養(yǎng)法對乳腺炎病原診斷的效果31-39
• 1 試驗材料與方法31-32
• 1.1 奶樣的采集31
• 1.2 試驗主要儀器及試劑31
• 1.2.1 主要儀器31
• 1.2.2 主要試劑31
• 1.3 試驗方法31-32
• 1.3.1 乳樣中細菌的檢測鑒定31-32
• 1.3.2 藥敏試驗32
• 1.3.3 乳樣中細菌DNA的提取32
• 1.3.4 引物的設計及PCR擴增32
• 1.4 統(tǒng)計學方法32
• 2 試驗結果32-38
• 2.1 乳樣細菌培養(yǎng)與多重PCR檢測結果的比較32-33
• 2.2 多重PCR和細菌學培養(yǎng)法對3種病原菌檢測結果的比較33-38
• 3 討論38-39
• 3.1 多重PCR與細菌培養(yǎng)靈敏性對比38
• 3.2 多重PCR技術分析38-39
• 4 小結39
• 全文結論39-40
• 參考文獻40-44
• Abstract44-46
• 致謝46

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 呂潤全;奶牛乳腺炎預防和治療的研究進展[J];南京農專學報;2001年03期

2 朱志達;綠色藥物“乳炎消”、“消炎膏”治療奶牛乳腺炎與生產“無抗奶”[J];中國乳業(yè);2002年02期

3 高洪展;中藥治療奶牛乳腺炎與“放心奶”[J];中國乳業(yè);2002年04期

4 王志成;純中藥“乳炎快消”治療奶牛乳腺炎的療效觀察[J];乳業(yè)科學與技術;2002年03期

5 馬保臣,張玉利;奶牛乳腺炎防治的思考與探討[J];畜牧與獸醫(yī);2003年01期

6 閆艷;奶牛乳腺炎的預防與診治[J];中國牧業(yè)通訊;2003年24期

7 劉佩紅,黃忠,李維功,徐鋒;奶牛乳腺炎研究進展[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2003年06期

8 劉兆亮,于薦學,牟巍;自制克炎靈治療奶牛乳腺炎[J];養(yǎng)殖技術顧問;2003年12期

9 劉錫武,馬保臣;奶牛乳腺炎的調查報告[J];獸藥與飼料添加劑;2004年02期

10 李繼紅,趙貴亮;“消炎散”治療奶牛乳腺炎[J];河南畜牧獸醫(yī);2004年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉佩紅;黃忠;王建;沈莉萍;;奶牛乳腺炎病原的分離鑒定及耐藥性分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會成立20周年慶典暨第十次學術研討會論文集（下）[C];2003年

2 鄭愛武;魏剛才;;奶牛乳腺炎的防制[A];河南省畜牧獸醫(yī)學會第七屆理事會第二次會議暨2008年學術研討會論文集[C];2008年

3 溫劉發(fā);魏能;楊金波;;廣東地區(qū)奶牛乳腺炎病原菌耐藥株的分離鑒定[A];格萊姆抗菌肽——抗菌肽開發(fā)與應用技術研討會論文集[C];2009年

4 周學輝;;奶牛乳腺炎的克星“速效乳炎散”介紹[A];全國養(yǎng)羊生產與學術研討會議論文集（2003～2004）[C];2004年

5 孫懷昌;;奶牛乳腺炎的基因治療研究[A];2005全國第二屆核酸疫苗研討會論文集[C];2005年

6 楊章平;毛永江;湯曉良;耿巖;;奶牛乳腺炎抗性的遺傳學研究與應用[A];中國奶牛協(xié)會2007年會論文集（上冊）[C];2007年

7 潘志忠;謝光洪;周昌芳;張乃生;郭昌明;曹永國;邵譜;;奶牛乳腺炎疫苗研究進展[A];吉林省畜牧獸醫(yī)學會2007學術年會論文集[C];2007年

8 王春t

本文編號：269843