【摘要】：對(duì)蝦急性肝胰腺壞死病(acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)致病性強(qiáng)、死亡率高、傳播范圍廣,是目前危害對(duì)蝦養(yǎng)殖最嚴(yán)重的疾病之一。2009年以來急性肝胰腺壞死病在全國沿海地區(qū)的對(duì)蝦養(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)頻繁發(fā)生,其排塘率高達(dá)80%以上,對(duì)我國對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)影響深重,造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。本實(shí)驗(yàn)旨在通過以口服細(xì)菌的方法進(jìn)行人工感染實(shí)驗(yàn),分析了從患病對(duì)蝦病灶處分離的五株潛在致病菌的致病力,確定了四株細(xì)菌為凡納濱對(duì)蝦急性肝胰腺壞死病的致病原;同時(shí),研究了四種消毒劑對(duì)四種病原菌的殺滅濃度、殺滅時(shí)間及殺滅率的關(guān)系,篩選出一種高效、綠色消毒劑聚六亞甲基胍(PHMG);應(yīng)用候選高效抗菌素“HPP-1”(20%氟苯尼考)和PHMG,建立對(duì)蝦養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)弧菌的定量化控制技術(shù),在全國沿海多地對(duì)蝦主產(chǎn)區(qū)進(jìn)行AHPND的預(yù)防及治療中試實(shí)驗(yàn)。1、五株急性肝胰腺壞死病潛在致病菌的致病力分析課題組在浙江、江蘇、山東、河北、天津等地患AHPND對(duì)蝦病灶處分離五株優(yōu)勢(shì)菌株P(guān)V130715A、PV130903A、PV140731A、PV150526A、PV140821A,利用早期分離的上述五株細(xì)菌分別以口服方法進(jìn)行人工回接感染實(shí)驗(yàn)。以5.89~58915.94cell/g對(duì)蝦的總細(xì)菌數(shù)量,通過連續(xù)口服3d含菌餌料(每天一次)的方法統(tǒng)計(jì)分析凡納濱對(duì)蝦累積死亡率及感染對(duì)蝦的發(fā)病癥狀,對(duì)五株潛在致病菌的致病力進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示,經(jīng)人工回接感染證實(shí),其中四株細(xì)菌可引起健康對(duì)蝦致病,其感染癥狀與自然發(fā)病的AHPND典型癥狀相似;并從感染對(duì)蝦病灶處重新分離出四株優(yōu)勢(shì)菌株P(guān)V130903B、PV140731B、PV150526B、PV140821B,通過生理生化及16S rDNA分子鑒定表明PV130903A與PV130903B為同一株菌,鑒定為副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus);PV140731A與PV140731B為同一株菌,鑒定為哈維氏弧菌(Vibrio harveyi);PV150526A與PV150526B為同一株菌,鑒定為溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus);PV140821A與PV140821B為同一株菌,鑒定為Vibrio sp.Ex25。根據(jù)科赫法則、發(fā)病癥狀、病理特征,確定了副溶血弧菌、哈維氏弧菌、溶藻弧菌、Vibrio sp.Ex25是AHPND的致病原。按照寇氏法則計(jì)算這四株病原菌的LD50分別為1.8×10~5cfu/g、8.5×10~4cfu/g、2.3×10~5cfu/g和2.9×10~5cfu/g。對(duì)凡納濱對(duì)蝦而言,哈維氏弧菌的致病力高于副溶血弧菌、溶藻弧菌、Vibrio sp.Ex25。而PV130715A是嗜水氣單胞菌,并非AHPND的致病原。2、幾種消毒劑對(duì)養(yǎng)殖對(duì)蝦急性肝胰腺壞死病致病菌的殺滅實(shí)驗(yàn)研究筆者對(duì)分離鑒定的副溶血弧菌、哈維氏弧菌、溶藻弧菌、Vibrio sp.Ex25四株致病菌進(jìn)行了定性及定量殺菌實(shí)驗(yàn),研究了聚六亞甲基胍(PHMG)、雙氧水(H_2O_2)、聚維酮碘(PVPI)及二氧化氯(ClO_2)四種消毒劑對(duì)四株致病菌的殺滅濃度、殺滅時(shí)間及殺滅率的比較分析。結(jié)果表明,在24h內(nèi)的殺菌濃度上,濃度為0.5μl/L的PHMG可將副溶血弧菌、哈維氏弧菌、Vibrio sp.Ex25三株細(xì)菌全部殺滅,濃度為1μl/L的PHMG可將四株細(xì)菌全部殺滅;濃度為0.5μl/L的雙氧水可將Vibrio sp.Ex25殺滅,濃度為1μl/L的雙氧水可將四株病原菌全部殺滅;濃度為6μl/L的聚維酮碘可將副溶血弧菌、Vibrio sp.Ex25殺滅,濃度為8μl/L的聚維酮碘可將四株細(xì)菌全部殺滅;濃度為2μl/L的二氧化氯可將四株細(xì)菌全部殺滅。在殺菌時(shí)間上,10min內(nèi),PHMG和雙氧水殺滅副溶血弧菌、哈維氏弧菌、Vibrio sp.Ex25的最低濃度均為1μl/L,二氧化氯殺滅副溶血弧菌、哈維氏弧菌、Vibrio sp.Ex25的最低濃度為2μl/L,而聚維酮碘需高達(dá)10μl/L才能完全殺滅四種細(xì)菌;在1h內(nèi),濃度為2μl/L的二氧化氯可完全殺滅四種細(xì)菌;在2h內(nèi),濃度為1μl/L的PHMG和雙氧水可完全殺滅四種細(xì)菌。隨著時(shí)間的推移,PHMG和聚維酮碘顯示出持續(xù)殺菌的能力,殺菌率隨時(shí)間的推移逐漸升高,雙氧水和二氧化氯的殺菌率在達(dá)到峰值之后均有不同程度的下降,濃度越高,其到達(dá)峰值殺菌率的時(shí)間越短。綜合比較分析,這四種消毒劑對(duì)AHPND致病菌的殺菌能力強(qiáng)弱為PHMG雙氧水二氧化氯聚維酮碘。結(jié)合消毒劑的殺菌濃度、殺菌效果、持續(xù)時(shí)間及使用成本等幾個(gè)方面考慮,認(rèn)為PHMG具有綠色、安全、高效等優(yōu)點(diǎn),在水產(chǎn)養(yǎng)殖中將會(huì)有良好的應(yīng)用前景。3、候選藥物對(duì)養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)弧菌的殺滅效果及養(yǎng)殖應(yīng)用示范本研究采用口服專用藥物“HPP-1”殺滅對(duì)蝦肝胰腺弧菌和潑灑水體消毒劑聚六亞甲基胍(PHMG)殺滅養(yǎng)殖水體中弧菌相結(jié)合的方法,在天津、河北、江蘇、浙江、山東等多地的12處養(yǎng)殖場進(jìn)行了AHPND的預(yù)防及治療中試實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示:在疾病預(yù)防實(shí)驗(yàn)中,PHMG在0.5μl/L濃度作用下弧菌總量第4d下降到最低值,下降總量為初始值的80.84%;PHMG在1μl/L濃度下第3d弧菌總量下降到最低值,下降總量為85.67%;PHMG在2μl/L濃度下第第3d下降到最低值,下降總量為88.60%;在治療實(shí)驗(yàn)中,PHMG在0.5μl/L濃度作用下弧菌總量第3d下降到最低值,下降總量為65.25%;PHMG在1μl/L濃度下第3d弧菌總量下降到最低值,下降總量為62.29%;PHMG在2μl/L濃度下第3d下降到最低值,下降總量為87.05%。施用一次PHMG,濃度在0.5~2μl/L范圍內(nèi),第11d池塘水體內(nèi)弧菌總量仍低于初始值。通過口服專用藥物“HPP-1”藥餌(劑量6g/kg飼料,連續(xù)投喂5d),實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦肝胰腺內(nèi)可培養(yǎng)弧菌總數(shù)直線下降;投喂3d后,各實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦肝胰腺內(nèi)弧菌總數(shù)的殺滅率達(dá)99%以上;投喂藥餌5d后停藥,然后從第6d(停藥1d后)開始,各實(shí)驗(yàn)組肝胰腺內(nèi)弧菌總數(shù)呈緩慢增長,直到第15d(停藥10d后)對(duì)蝦肝胰腺內(nèi)的弧菌總數(shù)仍然大大低于初始值。對(duì)蝦養(yǎng)殖收獲的統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明:在AHPND的預(yù)防實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)組11口土塘、9口小棚,未見AHPND暴發(fā),發(fā)病率為0%,最終土塘養(yǎng)殖模式下對(duì)蝦產(chǎn)量分別為:128kg/畝(規(guī)格24只/kg,FCR1.03)和304.5kg/畝(規(guī)格54只/kg,FCR1.02);小棚養(yǎng)殖模式下對(duì)蝦產(chǎn)量767kg/畝(規(guī)格52只/kg,FCR1.06);對(duì)照組中,5口土塘均暴發(fā)AHPND,全部死亡后排塘處理;8口小棚其中6口暴發(fā)AHPND,發(fā)病率75%。在AHPND的治療實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)組59口土塘、10口小棚、85口高位池、63口室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖池中治愈了53口土塘、10口小棚、60口高位池、63口室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖池,治愈率約86.92%;最終土塘產(chǎn)量109kg/畝~370kg/畝,FCR1.02~1.05;小棚產(chǎn)量567kg/畝,FCR1.08;高位池產(chǎn)量2109.75kg/畝以上,FCR0.97~1.09;室內(nèi)工廠化產(chǎn)量7.9kg/m2,FCR1.18。未采取治療措施的對(duì)照組均暴發(fā)AHPND而排塘處理。多地的預(yù)防及治療中試實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:采用口服專用藥物“HPP-1”和水體消毒劑PHMG相結(jié)合的方法能有效定量控制對(duì)蝦體內(nèi)和養(yǎng)殖水體中的弧菌總數(shù),該套防控技術(shù)方法實(shí)用性和可操作性強(qiáng)、預(yù)防效果好、治愈率高,為有效防控AHPND、實(shí)現(xiàn)對(duì)蝦健康養(yǎng)殖具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S945.49

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本文編號(hào)：2328957