發(fā)布時間：2018-06-10 16:11

  本文選題：J亞群禽白血病病毒 + 馬立克氏病病毒　； 參考：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：近年來,J亞群禽白血病病毒(ALV-J)和馬立克氏病病毒(MDV)共感染和協(xié)同致病的現(xiàn)象廣泛發(fā)生,給我國養(yǎng)禽業(yè)帶來了嚴(yán)重的損失,然而,關(guān)于ALV-J和MDV協(xié)同感染機制尚不明了。本研究在證明ALV-J和MDV具有共同感染同一細胞能力的基礎(chǔ)上,擬通過對共感染ALV-J和MDV在細胞轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達水平、細胞因子及病理組織學(xué)等與單獨感染的差異性分析,證明ALV-J與MDV具有協(xié)同促進相互復(fù)制,協(xié)同增強感染和致病能力,為揭示ALV-J和MDV協(xié)同感染機制,研究聯(lián)合防控及其它病毒間協(xié)同感染機制奠定了科學(xué)基礎(chǔ)。以10日齡無特定病原(SPF)雞胚制備雞胚成纖維細胞(CEF),接種ALV-J-NX0101病毒和MDV-MD5株病毒,設(shè)置4個實驗組:ALV-J+MDV感染組,ALV-J感染組,MDV感染組和無病毒空白對照組。經(jīng)PCR、間接免疫熒光(IFA)和禽白血病抗原(p27)檢測實驗組接毒成功。熒光定量結(jié)果顯示,在24h,ALV-J和MDV開始復(fù)制,72h前,共感染組細胞中MDV和ALV-J病毒RNA的復(fù)制速度和復(fù)制量均高于單獨感染組(P0.05),但由于細胞出現(xiàn)病變,表達高峰后共感染組病毒RNA表達量下降明顯快于單獨感染組(P0.05),證明了共感染組病毒具有更強的轉(zhuǎn)錄能力,對細胞損傷更嚴(yán)重,從而從病毒轉(zhuǎn)錄層面證明了MDV和ALV-J的協(xié)同促進復(fù)制和細胞致病作用;Western Blot結(jié)果顯示共感染72h的各組細胞蛋白的表達量出現(xiàn)明顯的差異,共感染組明顯高于單獨感染組,從而在蛋白層面證明了共感染組兩種病毒協(xié)同促進各自蛋白的表達;激光共聚焦結(jié)果顯示,與單獨感染MDV組相比,共感染組出現(xiàn)病變的時間提前24h,噬斑數(shù)量增加明顯;與單獨感染ALV-J組相比,相同時間點,共感染組感染ALV-J的細胞數(shù)量更多,病毒在細胞內(nèi)的復(fù)制量更大,對細胞的損傷更嚴(yán)重,說明MDV和ALV-J可感染同一細胞,且具有協(xié)同促進各自的復(fù)制能力和感染能力;體外實驗選取了與腫瘤有關(guān)的三種細胞因子(IL-6、IL-10、TGF-β),通過對此3種細胞因子表達水平的變化,說明共感染能促進炎癥反應(yīng)、增加免疫抑制作用、促進細胞分化,兩種病毒能有效改變細胞微環(huán)境來促進病毒表達。為了進一步驗證MDV與ALV-J的體內(nèi)協(xié)同作用,我們進行了體內(nèi)感染實驗,并在接種后1、3、5周齡連續(xù)剖殺三次。通過病理組織學(xué)和血液學(xué)分析,進一步證明了兩種病毒具有協(xié)同致病作用。血液學(xué)檢測顯示,混合感染組外周血白細胞數(shù)高于單獨感染組,明顯高于空白對照組,其中淋巴細胞和粒細胞數(shù)增加最明顯;通過臨床病理學(xué)、病理組織學(xué)進行動態(tài)的病理學(xué)研究。發(fā)病情況結(jié)果顯示,共感染組、ALV-J感染組和MDV感染組分別在3、4周開始死亡,總體死亡率分別為20.0%、3.33%和10.0%。大體病變結(jié)果顯示,混合感染組2~4周肝、脾、腎稍腫大,并有肝周炎、心包炎等,所有組織器官在2周時開始出現(xiàn)以幼稚淋巴細胞、大中小淋巴細胞為主的炎性浸潤灶,以4~5周最為明顯,共感染比單獨感染發(fā)病早1~2周、病變更明顯。提示共感染可加重初期的炎癥反應(yīng),使病死率升高,加快了病毒致瘤進程。本研究從不同層面和角度揭示了ALV-J和MDV的協(xié)同復(fù)制及致病作用,不僅對后續(xù)研究ALV-J與MDV協(xié)同機制明確了方向,更將為禽腫瘤病或其它禽病研究提供科學(xué)的理論依據(jù),為預(yù)防和治療禽腫瘤病提供新的思路。
[Abstract]:The results showed that ALV - J and MDV were co - infected with MDV - J and MDV - MD5 . In order to further verify the co - infection of MDV and ALV - J , the results showed that the co - infection group , ALV - J infection group and MDV infection group started to death at 3 and 4 weeks . The results showed that the co - infection could increase the initial inflammatory response , and the overall mortality rate was 20 . 0 % , 3 . 33 % and 10 . 0 % .
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S858.3

【參考文獻】

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1 屈素潔;施開創(chuàng);胡杰;張步嫻;尹彥文;粟艷瓊;莫勝蘭;李軍;鄒聯(lián)斌;;熒光定量PCR檢測雞馬立克氏病血清1型病毒方法的建立及應(yīng)用[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2015年04期

2 寧官保;田文霞;張園華;張鼎;張曉娜;韓凌霞;;MDV感染B19、B21單倍型SPF雞外周血淋巴細胞BLec1、BNK及細胞因子基因轉(zhuǎn)錄水平比較[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2015年07期

3 王姍;鄭金華;孟琰;孫長生;王鑫;蘇艷國;趙爾楊;;從細胞因子角度看腫瘤微環(huán)境對免疫細胞及腫瘤細胞的影響[J];腫瘤學(xué)雜志;2015年03期

4 段倫濤;蘇帥;王一新;李思菲;孫鵬;陳文青;崔治中;;敲除Meq基因的重組雞馬立克氏病毒與CVI988/Rispens疫苗株免疫保護效力的比較[J];微生物學(xué)報;2014年11期

5 鄧小蕓;祁小樂;張久麗;華育平;高玉龍;王笑梅;;J亞群禽白血病流行病學(xué)研究新進展[J];中國家禽;2014年16期

6 劉金花;趙艷;孫煥芹;劉寧;喬桂芳;王子康;徐杰;李昂;張永宏;;HCV對HIV/HCV共感染患者病情進展的影響[J];臨床肝膽病雜志;2014年06期

7 劉昒;趙琴平;董惠芬;蔣明森;;TGF-β信號傳導(dǎo)通路及其生物學(xué)功能[J];中國病原生物學(xué)雜志;2014年01期

8 程洋;馮澤清;楊輝林;劉益平;朱慶;;雞馬立克氏病毒SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR檢測方法的建立[J];四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2013年04期

9 齊育英;林振忠;明德松;;IL-6、IL-10、IL-17在慢性乙型病毒性肝炎患者血中水平分析[J];中國免疫學(xué)雜志;2013年11期

10 馬文東;袁媛;楊奕;徐洪;鄧海靜;于婉瑩;孫月;魏中秋;楊方;;TGF-β_1介導(dǎo)的RhoA/ROCK通路在大鼠肺肌成纖維細胞分化中的調(diào)節(jié)作用[J];中國病理生理雜志;2013年10期

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1 蘇帥;重組馬立克氏病毒及其突變株生物學(xué)活性的比較研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

2 楊萍萍;禽波氏桿菌的定植規(guī)律、基因分型以及與REV共感染的協(xié)同致病作用研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 丁家波;馬立克氏病病毒pp38基因及其上游雙向啟動子的生物學(xué)特性[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

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1 王波;泰山柴雞三種禽腫瘤病病毒共感染的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 鄭永勝;雞馬立克氏病病毒疫苗株對強毒株感染的干擾分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

3 王海斌;HIV/HBV/HCV共感染者病毒載量間及與T淋巴細胞亞群的相關(guān)性研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

4 董征英;內(nèi)源性ALV的全基因測序、J-ALV實時熒光定量PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

5 丁維民;TaqMan-MGB探針雙重?zé)晒舛縋CR方法絕對定量MDV-Ⅰ和HVT[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

6 王麗;TLR4信號通路促進腫瘤細胞分泌MIP-3alpha參與腫瘤免疫逃逸的研究[D];浙江大學(xué);2007年

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本文編號：2003809