本文選題：茴香霉素 + MPF　； 參考：《延邊大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：孤雌激活與體細(xì)胞核移植在動(dòng)物育種、生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、建立動(dòng)物模型、保護(hù)珍稀瀕危動(dòng)物、提供人造器官異種移植研究以及發(fā)育生物學(xué)的研究等方面有著重要的作用與意義。而卵母細(xì)胞激活是影響孤雌激活和體細(xì)胞核移植效率的重要因素之一。同時(shí)也是確定孤雌激活和核移植以及隨后的克隆胚胎的發(fā)育的基本要素之一。因此,如何有效提高卵母細(xì)胞激活效率具有十分重要的意義。而茴香霉素是一種蛋白合成抑制劑,首次在牛孤雌激活胚胎和體細(xì)胞核移植激活處理上應(yīng)用,發(fā)現(xiàn)能夠顯著提高牛的孤雌激活胚胎和體細(xì)胞核移植胚胎囊胚率并提高囊胚質(zhì)量。但茴香霉素應(yīng)用在豬的孤雌激活胚胎和體細(xì)胞核移植胚胎尚未見(jiàn)報(bào)道。所以在本研究中,我們利用蛋白質(zhì)合成抑制劑茴香霉素在電激活后處理豬的孤雌激活胚胎和體細(xì)胞核移植胚胎來(lái)觀察實(shí)驗(yàn)效果。我們獲得以下試驗(yàn)結(jié)果:1.茴香霉素,CB組與未處理組對(duì)比胚胎排出第二極體。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)茴香霉素和未處理組與CB組相比在排出第二極體上差異顯著。(51.9%and 51.6%vs.14.3%p0.05),結(jié)果說(shuō)明茴香霉素不能抑制第二極體的排出。2.茴香霉素在1μg/mL與其他各個(gè)濃度下的胚胎發(fā)育到2-4細(xì)胞階段有顯著差異(table3-2)。通過(guò)Hoechest 33342染色的方法觀察茴香霉素處理組與對(duì)照組(CB)在囊胚的細(xì)胞數(shù)上沒(méi)有著顯著性差異(table2),0.01 μg/mL,0.1 μg/mL藥物濃度與1 μg/mL及對(duì)照組在達(dá)到囊胚的效率上有顯著地差異(31.8%and 27.1%vs.0 and 16.7%,p0.05)。在最佳濃度下的茴香霉素處理不同的時(shí)間下觀察胚胎發(fā)育能力。分別測(cè)量了 Oh,2h,4h,6h,下胚胎的發(fā)育能力,結(jié)果顯示:茴香霉素是在處理2,4,6h下孤雌激活胚胎有最好的發(fā)育能力(39.5%,33.3%and29.2%vs.20.3%,p0.05)。同樣,在胚胎發(fā)育到 2-4 細(xì)胞時(shí)期,以及囊胚平均細(xì)胞數(shù)上都沒(méi)有顯著差異。以上結(jié)果表明:茴香霉素的最佳處理?xiàng)l件為0.01 μg/mL下作用2h。3.6-DMAP,茴香霉素與未處理組對(duì)孤雌激活胚胎的影響,茴香霉素處理組和6-DMAP處理組與未處理組相比,在2-4細(xì)胞時(shí)期和囊胚平均細(xì)胞數(shù)上并無(wú)顯著性差異,在胚胎發(fā)育情況上,茴香霉素處理組和6-DMAP處理組與未處理組相比,能夠顯著提高孤雌激活胚胎發(fā)育能力(37.6%and 30.0%vs 19.9%,p0.05)。4.孤雌激活胚胎在0.01μg/mL茴香霉素作用4h下測(cè)量MPF活性,結(jié)果顯示茴香霉素處理下的孤雌生殖胚胎MPF水平明顯低于對(duì)照組(361.3 pg/ml vs 254.2 pg/mL,p0.05)。5.在染色體我們對(duì)激活7天左右的分別來(lái)自茴香霉素處理組,6-DMAP處理組和對(duì)照組(CB)處理的早期囊胚進(jìn)行核型分析。結(jié)果顯示茴香霉素與6-DMAP處理組和對(duì)照(CB)差異顯著(33.3%vs60%and 50%,p0.05)以上結(jié)果表明:在茴香霉素處理下可以降低囊胚染色體異常比例。6.PA胚胎在0.01μg/mL茴香霉素作用4h下通過(guò)RT-PCR檢測(cè)多能性基因(Sox2,Oct4,Nanog)和凋亡基因(Blc-2,Bax),實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明茴香霉素對(duì)PA囊胚的多能性基因和凋亡基因并無(wú)顯著性影響。7.6-DMAP,茴香霉素與未處理組對(duì)SCNT胚胎的影響,茴香霉素處理組和6-DMAP處理組與未處理組相比,在2-4細(xì)胞時(shí)期和囊胚平均細(xì)胞數(shù)上并無(wú)顯著性差異,在胚胎發(fā)育情況上,茴香霉素處理組與未處理組相比,能夠顯著提高SCNT胚胎發(fā)育能力(18.3%vs 4.2%p0.05)。結(jié)論:1)茴香霉素能夠通過(guò)改變MPF活性來(lái)影響孤雌激活胚胎和體細(xì)胞核移植胚胎的發(fā)育能力。2)茴香霉素能夠顯著降低孤雌激活囊胚染色體異常比例。3)茴香霉素對(duì)孤雌激活囊胚的多能性基因(Sox2,Oct4,Nanog)和凋亡基因(Blc-2,Bax)并無(wú)顯著影響。其中,茴香霉素處理的最佳條件為0.01 μg/mL,2h。
[Abstract]:In this study , we found that there was no significant difference ( 51.9 % and 51.6 % vs.14 . 3 % p . 05 ) . The results showed that there was no significant difference between the treatment group and the untreated group . The results showed that there was no significant difference between the treatment group and the untreated group . The results showed that there was no significant difference between the treatment group and the untreated group . Conclusion : 1 ) The development of embryo and somatic cell nuclear transfer embryos can be influenced by the change of MPF activity .

【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S828
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本文編號(hào)：1817252