本文選題：蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域 + 神經(jīng)壞死病毒��； 參考：《中山大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：病毒性神經(jīng)壞死病(Viral nervous necrosis,VNN)是一種嚴(yán)重危害海水魚類養(yǎng)殖的疾病,主要感染魚類仔魚期和稚魚期,魚類一旦受到感染,就會造成80%-100%的死亡率,進(jìn)而給魚類養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。病毒性神經(jīng)壞死病的病原體是神經(jīng)壞死病毒(nervous necrosis virus,NNV),是一類二十面體,非囊膜包被的RNA病毒。目前對于VNN的免疫治療主要是通過疫苗免疫,如重組蛋白,DNA疫苗等,或通過抗NNV生物大分子,例如siRNA,抗病毒多肽等。但是藥物的治療效果往往受到藥物運(yùn)輸?shù)挠绊憰蟠蛘劭?尤其是體內(nèi)導(dǎo)入時細(xì)胞膜等屏障的阻隔。因此如何在保證藥物有效濃度的情況下,使這些生物大分子藥物能夠穿透細(xì)胞膜屏障,精確地到達(dá)靶標(biāo)部位,發(fā)揮其治療作用,是一個值得深入研究的課題。本實驗室在斜帶石斑魚神經(jīng)壞死病毒(orange-spotted grouper nervous necrosis virus,OGNNV)的衣殼蛋白(capsid protein,CP)所形成的類病毒粒子(virus-like particle,VLP)基礎(chǔ)上,發(fā)現(xiàn)了位于OGNNV-CP的N端其中14個氨基酸的序列具有蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域功能(protein transduction domain,PTD),并命名為NNV-PTD。將NNV-PTD與蛋白融合表達(dá),發(fā)現(xiàn)它可以將融合蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)亞洲海鱸胚胎全細(xì)胞(Asian sea bass,SB)。本文通過將NNV-PTD刪除或者轉(zhuǎn)移到CP的C末端,發(fā)現(xiàn)NNV-PTD對于OGNNV-VLP立體結(jié)構(gòu)的形成不具有決定性的作用,CP仍然可以形成顆粒結(jié)構(gòu),并且可以進(jìn)入SB細(xì)胞。進(jìn)一步對NNV-PTD的細(xì)胞導(dǎo)入機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),NNV-PTD是通過內(nèi)吞途徑進(jìn)入細(xì)胞,因為在4℃時,NNV-PTD不能轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)SB細(xì)胞。通過化學(xué)抑制劑實驗,證實了NNV-PTD是通過網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑進(jìn)入SB細(xì)胞,并且依賴于細(xì)胞骨架、pH值、發(fā)動蛋白、脂質(zhì)和膽固醇等因素。同時,NNV-PTD也通過巨胞飲途徑進(jìn)入SB細(xì)胞,且該途徑中巨胞飲體的形成是肌球蛋白Ⅱ依賴性的。這一點(diǎn)與VLP僅依賴于網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)內(nèi)吞途徑而與巨胞飲途徑無關(guān)的方式入侵SB細(xì)胞是有差別的。通過細(xì)胞篩選實驗我們發(fā)現(xiàn),NNV-PTD可以進(jìn)入多種細(xì)胞系,包括昆蟲細(xì)胞S2和SF9,魚類細(xì)胞GB、SSN-1和MFF-1,哺乳類細(xì)胞Hela。說明了NNV-PTD的適用性很廣泛,作為一種新的蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域具有很大的潛力,可以為抗病毒生物大分子類藥物穿越細(xì)胞膜屏障,達(dá)到靶標(biāo)部位,發(fā)揮治療作用提供可能。本研究闡述了NNV-PTD的入侵機(jī)制和依賴因素,不僅為其導(dǎo)入應(yīng)用提供理論依據(jù),而且為VNN的預(yù)防和治療提供了新的思路和應(yīng)用。
[Abstract]:Viral - like particle ( NNV ) is a kind of viral - like particle ( NNV ) , which is a kind of virus - like particle ( NNV ) . It was found that NNV - pD can enter SB cells through endocytosis , and it can be used as a new protein transduction domain . It is suggested that NNV - pis a new protein transduction domain , and it can be used as a new protein transduction domain .

【學(xué)位授予單位】：中山大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S941.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1760637