本文選題：斑節(jié)對(duì)蝦 + 幾丁質(zhì)酶��； 參考：《上海海洋大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeus monodon)是世界上重要的對(duì)蝦養(yǎng)殖品種之一。蛻殼(蛻皮)伴隨著斑節(jié)對(duì)蝦整個(gè)生活史,與其幼體的變態(tài)發(fā)育,幼蝦的生長(zhǎng)以及成蝦的交配息息相關(guān)。在蛻皮過(guò)程中發(fā)揮相關(guān)作用的基因很多,例如蛻皮抑制激素(MIH),高血糖激素(CHH)等。本研究中的幾丁質(zhì)酶基因也是蛻皮過(guò)程中發(fā)揮重要作用的基因,其功能涉及到蛻殼、幾丁質(zhì)食物的消化、免疫應(yīng)答以及圍食膜的消化等。幾丁質(zhì)酶基因在甲殼動(dòng)物中的報(bào)道不多,在斑節(jié)對(duì)蝦僅報(bào)道過(guò)2次,因此,開(kāi)展幾丁質(zhì)酶基因的相關(guān)研究,有助于更好的了解蛻皮機(jī)理,更清晰的了解斑節(jié)對(duì)蝦的生長(zhǎng)過(guò)程,為將來(lái)的分子輔助育種提供理論支撐。本研究以本實(shí)驗(yàn)室測(cè)得的肝胰腺轉(zhuǎn)錄組(未發(fā)表)中幾丁質(zhì)酶基因序列片段,通過(guò)RACE技術(shù)克隆出了斑節(jié)對(duì)蝦3個(gè)幾丁質(zhì)酶基因的全長(zhǎng)序列,命名為PmChi-2、PmChi-4和PmChi-5(登錄號(hào)分別為:KX610684、KY210138和KY865407),cDNA全長(zhǎng)分別為2050 bp、2178 bp和2860 bp,開(kāi)放閱讀框分別為1587 bp、1815 bp和1731 bp,分別編碼528、604和576個(gè)氨基酸。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)顯示PmChi-2在斑節(jié)對(duì)蝦9個(gè)檢測(cè)組織中,表皮的表達(dá)量最高,胃和鰓次之,眼柄和胸神經(jīng)節(jié)表達(dá)量很低,。在蛻皮各期(A、C、D以及E期)的研究中發(fā)現(xiàn)PmChi-2在鰓中A期的表達(dá)最高,E期最低;胃和表皮中D期最高,E期最低。在幼體不同發(fā)育階段,PmChi-2基因從無(wú)節(jié)幼體一直到糠蝦幼體第二期,表達(dá)量沒(méi)有顯著變化,到糠蝦幼體第三期,表達(dá)量顯著升高,且達(dá)到最高的表達(dá)水平,緊接著仔蝦第一期又顯著下降,之后表達(dá)水平處于較低的水平。據(jù)此推測(cè)PmChi-2可能在斑節(jié)對(duì)蝦幼體的蛻皮以及幼體的變態(tài)發(fā)揮重要作用。PmChi-4在斑節(jié)對(duì)蝦不同組織中肝胰腺中表達(dá)最高,腸和胃次之,其余組織表達(dá)量很低。在蛻皮各期的研究中發(fā)現(xiàn)PmChi-4在胃中相對(duì)表達(dá)量變化不顯著,而腸和肝胰腺中表達(dá)量變化呈現(xiàn)顯著性差異,并且表達(dá)模式也很相似。腸和肝胰腺在蛻皮周期中表達(dá)量最高都是出現(xiàn)在E期,但腸的最低表達(dá)量出現(xiàn)在D期,而肝胰腺的最低表達(dá)量出現(xiàn)在C期。在幼體不同發(fā)育階段,PmChi-4基因從無(wú)節(jié)幼體一直到糠蝦幼體第二期,PmChi-4的表達(dá)量出現(xiàn)了一定的波動(dòng),但是沒(méi)有顯著變化,到糠蝦幼體第三期,表達(dá)量顯著升高,且達(dá)到最高的表達(dá)水平,在糠蝦幼體第三期后PmChi-4的表達(dá)量也存在一定的波動(dòng)性,但變化依然不顯著。在注射陽(yáng)性菌S.agalactiae和陰性菌V.harveyi之后,選取斑節(jié)對(duì)蝦的肝胰腺和鰓進(jìn)行PmChi-4表達(dá)量的變化的檢測(cè),結(jié)果顯示在注射S.agalactiae和V.harveyi后的幾個(gè)小時(shí)內(nèi)與對(duì)照組相比肝胰腺和鰓中都出現(xiàn)了顯著上調(diào),之后下調(diào)到比較低的水平,并持續(xù)保持這種低水平。在氨氮應(yīng)激的下,選取斑節(jié)對(duì)蝦的肝胰腺和鰓進(jìn)行PmChi-4表達(dá)量的變化的檢測(cè),與對(duì)照組相比較,不管是高氨氮還是低氨氮,在肝胰腺和鰓中的表達(dá)量都存在波動(dòng),并且都表現(xiàn)為應(yīng)激之后顯著下調(diào),之后保持較低的表達(dá)水平。依據(jù)上述一系列實(shí)驗(yàn)推測(cè)PmChi-4可能與斑節(jié)對(duì)蝦圍食膜的降解、幾丁質(zhì)食物的消化、幼體的變態(tài)發(fā)育以及免疫應(yīng)答有關(guān)。PmChi-5在斑節(jié)對(duì)蝦蛻皮周期中不同組織中肝胰腺和鰓中表達(dá)水平最高,眼柄和表皮次之,心臟、腸、胃、肌肉,胸神經(jīng)中表達(dá)水平比較低。在肝胰腺、眼柄、鰓以及表皮蛻皮各期研究中發(fā)現(xiàn)PmChi-5在這4個(gè)組織中的變化模式都不盡相同。在肝胰腺中,PmChi-5表達(dá)量最高出現(xiàn)在C期,最低出現(xiàn)在A期;在眼柄中,最高出現(xiàn)在C期,最低出現(xiàn)在D期;在鰓中,最高出現(xiàn)在C期,最低出現(xiàn)在A期;在表皮中,最高出現(xiàn)在D期,最低出現(xiàn)在A期。PmChi-5基因在幼體不同發(fā)育階段從無(wú)節(jié)幼體一直到糠蝦幼體第二期,表達(dá)量一直保持著較低的水平,到糠蝦幼體第三期,表達(dá)量顯著升高,且達(dá)到最高的表達(dá)水平,之后保持著較低的水平。在注射S.agalactiae和V.harveyi之后,選取斑節(jié)對(duì)蝦的肝胰腺和鰓進(jìn)行PmChi-5表達(dá)量的變化的檢測(cè),結(jié)果顯示在注射S.agalactiae后肝胰腺和鰓與對(duì)照組相比出現(xiàn)顯著上調(diào),甚至出現(xiàn)兩個(gè)峰值。在氨氮應(yīng)激的下,選取斑節(jié)對(duì)蝦的肝胰腺和鰓進(jìn)行PmChi-5表達(dá)量的變化的檢測(cè),與對(duì)照組相比較,不管是高氨氮還是低氨氮,在肝胰腺和鰓中的表達(dá)量都存在波動(dòng),整體的變化趨勢(shì)為先升高后降低。依據(jù)上述一系列的實(shí)驗(yàn)推測(cè)PmChi-5可能參與斑節(jié)對(duì)蝦的蛻皮、幼體的變態(tài)發(fā)育以及免疫應(yīng)答。
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【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1744560