本文選題：銅綠假單胞菌　切入點：肺炎克雷伯菌　出處：《吉林大學》2017年碩士論文

【摘要】：目前水貂養(yǎng)殖以散養(yǎng)戶為主,養(yǎng)殖戶的防疫管理意識淡薄,高密度養(yǎng)殖、糞便污染和抗生素濫用導致攜毒力因子的銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌等環(huán)境常在菌出現(xiàn)并大量繁殖,病原菌引起的耐藥性問題日益突出。近年來,銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌引起的水貂肺炎常于水貂的換毛期暴發(fā)流行,給養(yǎng)殖戶帶來重大經(jīng)濟損失。鑒于目前市場應用的疫苗均為臨床分離的完整菌體抗原存在攜帶耐藥基因和毒力基因的風險,以及由于血清型的復雜致使免疫效果不確實的問題,本研究從臨床分離的貂出血性肺炎強毒株-銅綠假單胞菌精制蛋白組份和肺炎克雷伯菌提取莢膜多糖作為抗原,制備了針對兩病原的水貂銅綠假單胞菌-肺炎克雷伯菌二聯(lián)亞單位疫苗,并應用于水貂養(yǎng)殖場新生仔貂的免疫,驗證該疫苗對水貂肺炎的防控效果。本研究分別以常規(guī)方法提取并精制的肺炎克雷伯菌莢膜多糖和離子交換層析法提取臨床貂出血性肺炎強毒分離株銅綠假單胞菌培養(yǎng)物中抗原成分,將各抗原以氫氧化鋁為佐劑進行配苗,設置不同抗原組別,免疫小鼠后進行攻毒保護性實驗,實驗結(jié)果表明:銅綠假單胞菌菌體裂解上清液氫氧化鋁佐劑抗原與銅綠假單胞菌滅活菌體抗原免疫小鼠后均能誘導小鼠產(chǎn)生特異性抗體,兩種抗原誘導產(chǎn)生抗體水平無顯著差異,即兩種抗原針對銅綠假單胞菌臨床分離強毒株的攻擊的水貂具有相當水平的保護作用;肺炎克雷伯菌莢膜多糖具有良好的抗原性,誘導小鼠產(chǎn)生特異性抗體水平高于肺炎克雷伯菌菌體抗原,且差異顯著(P㩳0.05)。為驗證各抗原對原宿主動物水貂的免疫保護作用,將優(yōu)化各抗原組份,按滅活疫苗免疫程序免疫水貂,攻毒保護性實驗結(jié)果表明:銅綠假單胞菌菌體裂解上清液精制的多組份蛋白抗原誘導水貂產(chǎn)生的特異性抗體,抗體水平與銅綠假單胞菌滅活菌體抗原相比差異不顯著。將銅綠假單胞菌菌體裂解上清液精制的多組份蛋白和肺炎克雷伯菌莢膜多糖抗原以氫氧化鋁為佐劑進行配苗,制備出銅綠假單胞菌-肺炎克雷伯菌二聯(lián)亞單位疫苗中莢膜多糖具有良好的抗原性,對水貂銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌引起的肺炎具有100%的保護作用。批量制備銅綠假單胞菌-肺炎克雷伯菌二聯(lián)亞單位疫苗,在水貂養(yǎng)殖場推廣應用研究結(jié)果顯示:在水貂生產(chǎn)中,銅綠假單胞菌-肺炎克雷伯菌二聯(lián)亞單位疫苗免疫當年生產(chǎn)的仔貂對銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌引起的水貂肺炎具有良好的保護作用。綜上,肺炎克雷伯菌莢膜多糖與銅綠假單胞菌精制多蛋白組份抗原制備二聯(lián)亞單位疫苗能夠克服兩病原的毒力增強及耐藥性問題,對水貂具有良好的保護效果,可以作為一種用于水貂肺炎防控的安全、高效、無生物風險的亞單位候選疫苗。
[Abstract]:At present, mink farming is dominated by scattered farmers, whose awareness of epidemic prevention management is weak, high density culture, fecal pollution and abuse of antibiotics lead to the presence of Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae, which carry virulence factors, and so on. In recent years, mink pneumonia caused by Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae has become more prevalent in mink than in mink. Since the vaccines currently used in the market are all clinical isolates of intact bacterial antigens, there is a risk of carrying drug-resistant and virulent genes, and because of the complexity of serotypes, the immune effect is uncertain. In this study, capsule polysaccharides were extracted from purified protein components of Pseudomonas aeruginosa strain and Klebsiella pneumoniae strain as antigen. A binomial vaccine against Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae was prepared and used to immunize minks in mink farms. To verify the efficacy of the vaccine in the prevention and control of mink pneumonia. In this study, we used routine extraction and purification of Klebsiella pneumoniae capsule polysaccharides and ion exchange chromatography to extract pseudomonas aeruginosa from mink hemorrhagic pneumonia isolates. Antigenic components in bacterial cultures, Each antigen was inoculated with aluminum hydroxide as adjuvant, and different antigen groups were set up. The results showed that both aluminum hydroxide adjuvant antigen and inactivated Pseudomonas aeruginosa antigen could induce the production of specific antibodies in mice after immunization with the supernatant of Pseudomonas aeruginosa. There was no significant difference between the two antigen-induced antibody levels, that is, the minks attacked by the two antigens against the clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa had a significant protective effect, and Klebsiella pneumoniae capsule polysaccharides had good antigenicity. The specific antibody level induced in mice was higher than that of Klebsiella pneumoniae antigen, and the difference was significant (P < 0.05). In order to verify the immune protective effect of each antigen on mink, the antigen components will be optimized and the mink will be immunized according to the program of inactivated vaccine immunization. The results showed that the purified multicomponent protein antigen of Pseudomonas aeruginosa induced the specific antibody of mink. There was no significant difference between the antibody level and the inactivated bacterial antigen of Pseudomonas aeruginosa. The multicomponent protein purified from the supernatant of Pseudomonas aeruginosa and the capsule polysaccharide antigen of Klebsiella pneumoniae were mixed with aluminum hydroxide as adjuvant. The capsule polysaccharides of Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae double subunit vaccine were prepared. Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae have a 100% protective effect on pneumonia caused by Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae. The results of the research on popularization and application in mink farms show that: in mink production, Pseudomonas aeruginosa-Klebsiella pneumoniae duplex subunit vaccine has a good protective effect on mink pneumonia caused by Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae. The preparation of biphasic subunit vaccine with Klebsiella pneumoniae capsule polysaccharide and purified polyprotein component antigen of Pseudomonas aeruginosa can overcome the problems of virulence enhancement and drug resistance of the two pathogens and have a good protective effect on mink. It can be used as a safe, efficient and biohazard subunit candidate vaccine for mink pneumonia prevention and control.
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S858.92

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳寅兒;;分光光度法測定銅綠假單胞菌濃度的初步研究[J];水生態(tài)學雜志;2010年04期

2 沈莉萍,沈素芳,劉佩紅,王建;獅銅綠假單胞菌的分離與鑒定[J];畜牧與獸醫(yī);2002年09期

3 慶保平;丁海華;劉曉倩;任志宏;張耀相;;朱瀗銅綠假單胞菌的分離與初步鑒定[J];動物醫(yī)學進展;2009年12期

4 陳煜;楊燕凌;謝小芳;肖西志;;銅綠假單胞菌抗體制備及抑菌作用[J];動物醫(yī)學進展;2010年08期

5 李玲;陳立功;魏昆鵬;張芳;劉聚祥;任玉紅;董世山;;蛋雞銅綠假單胞菌的分離鑒定及其耐藥性和致病性研究[J];河北農(nóng)業(yè)大學學報;2014年03期

6 曾紀鋒;林杰材;李笑春;鄭繼平;廖世莊;;蟒蛇銅綠假單胞菌的分離鑒定及抗藥性分析[J];熱帶生物學報;2013年02期

7 芮萍;馬增軍;賀英;王秋悅;張建文;陳娟;;貂源銅綠假單胞菌對常用抗菌藥物的耐藥性檢測[J];畜牧與獸醫(yī);2013年09期

8 趙振振;許夢怡;許靜;王彥紅;;一株鴿源綠銅綠假單胞菌的分離與鑒定[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2014年04期

9 黃金海,王英珍,鄢明華,張健,白朋勛;雞的銅綠假單胞菌病的研究[J];動物醫(yī)學進展;2000年01期

10 于柏峰,張慧云,劉冰,谷海瀛;銅綠假單胞菌致病力和致病機理研究進展[J];微生物學雜志;2004年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 方莉;許媛;黃義山;蔡燕;唐中;楊明輝;廖濤;;銅綠假單胞菌金屬β-內(nèi)酰胺酶基因的檢測[A];中華醫(yī)學會第九次全國檢驗醫(yī)學學術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學術(shù)會議論文匯編[C];2011年

2 周明明;周鐵麗;李超;吳慶;陳櫟江;吳蓮鳳;彭定輝;;主動外排在銅綠假單胞菌耐藥中的作用研究[A];2009年浙江省檢驗醫(yī)學學術(shù)年會論文匯編[C];2009年

3 陳邦;王琰;茍曉峰;陳林;;嘧霉胺對銅綠假單胞菌基因的調(diào)節(jié)[A];第六屆全國化學生物學學術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

4 朱丹;李欣;;對亞胺培南耐藥的銅綠假單胞菌的體外藥敏分析[A];2005年浙江省呼吸系病學術(shù)年會論文匯編[C];2005年

5 洪波;貢聯(lián)兵;;銅綠假單胞菌對亞胺培南的藥敏分析[A];第五次全國中青年檢驗醫(yī)學學術(shù)會議論文匯編[C];2006年

6 徐海茹;田彬;岳娜;胡志東;;臨床分離的銅綠假單胞菌耐藥結(jié)果分析[A];第五次全國中青年檢驗醫(yī)學學術(shù)會議論文匯編[C];2006年

7 趙書平;姜梅杰;;神經(jīng)內(nèi)科重癥監(jiān)護室銅綠假單胞菌氨基糖苷類修飾酶基因研究[A];中華醫(yī)學會第七次全國檢驗醫(yī)學學術(shù)會議資料匯編[C];2008年

8 張杜超;方向群;;微重力對銅綠假單胞菌毒力影響及與肺部感染關(guān)系[A];2011年空間生命與生命起源暨航天醫(yī)學工程學術(shù)研討會論文集[C];2011年

9 李春梅;鐘曉祝;;銅綠假單胞菌醫(yī)院感染監(jiān)測分析[A];中華預防醫(yī)學會消毒分會學術(shù)年會論文匯編[C];2010年

10 熊娟;梁麗紅;;尿液中分離出產(chǎn)紅膿素的銅綠假單胞菌[A];2012全國臨床微生物與感染免疫學術(shù)研討會論文集[C];2012年

相關(guān)重要報紙文章 前5條

1 浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院 俞云松;銅綠假單胞菌耐藥全國流行[N];健康報;2008年

2 李曙平;銅綠假單胞菌 老年病房的主要致病菌[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

3 王振嶺;銅綠假單胞菌耐藥問題嚴重[N];中國醫(yī)藥報;2002年

4 天津醫(yī)科大學總醫(yī)院檢驗科 胡志東;關(guān)注銅綠假單胞菌對碳青霉烯類藥物的耐藥[N];健康報;2009年

5 ;碳青霉烯類抗生素[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2007年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 張瑞琴;氟喹諾酮類藥物誘導銅綠假單胞菌耐藥性及分子機制的研究[D];山西醫(yī)科大學;2015年

2 曹振輝;銅綠假單胞菌裂解性噬菌體的篩選、鑒定及應用[D];大連理工大學;2015年

3 蘇甜甜;銅綠假單胞菌鞭毛及生物膜調(diào)控蛋白FleQ和糖苷水解酶PslG的結(jié)構(gòu)與功能研究[D];山東大學;2015年

4 蔡雙啟;銅綠假單胞菌對頭孢哌酮鈉/舒巴坦鈉的耐藥變遷及差異蛋白組學和比較基因組學研究[D];廣西醫(yī)科大學;2016年

5 倪磊;銅綠假單胞菌蹭行運動和表面感知機制的研究[D];中國科學技術(shù)大學;2016年

6 張秋勤;生鮮雞肉中腐敗菌群體感應信號分子研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2014年

7 宋思捷;輕型鏈球菌促進銅綠假單胞菌致病性及機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

8 戴曉天;pH值對銅綠假單胞菌耐藥特征的影響及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2016年

9 張若文;燒傷病房耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌耐藥機制及分子流行病學研究[D];吉林大學;2012年

10 張亞妮;谷胱甘肽與銅綠假單胞菌致病性及抗生素抗性的關(guān)系研究[D];西北大學;2009年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 吳蘇敏;光動力療法抗多重耐藥銅綠假單胞菌感染的研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

2 賈子中;黃連素對燒傷創(chuàng)面銅綠假單胞菌生物膜干預試驗及自制中藥臨床應用觀察[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

3 王穎;新型抗耐藥革蘭氏陰性菌藥物的篩選研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

4 馬超;無機鎵化合物抗菌性能研究[D];西南交通大學;2015年

5 李九龍;PA0861在銅綠假單胞菌PAO1中作用的研究[D];寧夏醫(yī)科大學;2015年

6 梁紅梅;銅綠假單胞菌ATCC27853對秀麗隱桿線蟲的毒性研究[D];蘭州大學;2015年

7 胡凡;銅綠假單胞菌的耐藥表型與耐藥基因型研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學;2015年

8 王國旗;負壓創(chuàng)面療法治療銅綠假單胞菌感染創(chuàng)面的相關(guān)機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

9 饒慧華;clpP基因在銅綠假單胞菌毒力中的作用[D];福建醫(yī)科大學;2015年

10 姚遠;乳酸鈉抑制銅綠假單胞菌的優(yōu)化建模及其對豬肉持水力和蛋白質(zhì)的影響[D];上海理工大學;2013年

，

本文編號：1665625