本文關鍵詞：貓皰疹病毒Ⅰ型gI基因序列分析及PCR檢測方法的建立　出處：《內蒙古農業(yè)大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：貓病毒性鼻氣管炎(Feline viral rhinotracheitis,FVR)又稱貓傳染性鼻氣管炎,是由貓皰疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus type 1,FHV-1)引起貓科動物的一種急性高度接觸性傳染病,以上呼吸道癥狀為特征。主要侵害幼貓,發(fā)病率可高達100%,病死率50%。成年貓也可感染但病死率低,康復動物多成為帶毒動物可間歇性向體外排毒。該病在臨床癥狀上很難與貓其它上呼吸道疾病鑒別,目前獸醫(yī)臨床對該病尚未有快速準確的診斷方法,只能通過較為復雜繁瑣的實驗室診斷來確診該病。但無論病原分離培養(yǎng)還是血清學診斷,因實驗周期長、敏感性差等原因均未大范圍的應用于臨床。PCR診斷方法克服了傳統實驗室診斷的諸多弊端是診斷該病較為理想的方法。本實驗旨在建立一種特異性強、敏感性高的檢測FHV-1的PCR方法。根據GenBank發(fā)表的FHV-1基因序列選取gI基因為靶基因設計合成特異性引物,對疑似病料進行PCR擴增并克隆FHV-1 gI全基因和制備標準陽性質粒。對已建立的PCR診斷方法進行優(yōu)化同時對已優(yōu)化PCR診斷方法進行敏感性、特異性、重復性試驗驗證,并依賴本實驗建立的FHV-1 PCR方法對46份臨床樣本進行檢測。結果成功從疑似病料中擴增出FHV-1 gI基因并對其克隆制備標準陽性質粒,對質粒測序分析顯示所克隆的FHV-1 gI基因全長1155 bp與FHV-1各分離株同源性均在99.7%以上,進化樹分析結果顯示與澳大利亞株(KR381787.1)親緣關系最近。同時對PCR方法優(yōu)化確定最佳退火溫度為56℃C,最低檢測DNA模板濃度為3.23×103 copies/μL(即最低可檢測136.5 fg/μL的目標DNA)。在特異性檢測方面該方法可特異性檢出FHV-1無法檢出犬細小病毒(CPV)、犬瘟熱病毒(CDV)、綿羊肺炎支原體(Movis)、牛支原體(M.bovis)、牛皰疹病毒Ⅰ型(BHV-1)。另外運用本實驗所建立的PCR診斷方法對46份臨床待檢樣本進行檢測,檢出陽性為28份,陽性率為60.87%,對陽性樣本PCR產物進行序列分析與GenBank登錄的FHV-1代表株同源性均為99%以上。表明所建立的PCR診斷方法具有特異性強,敏感性高的特點,可運用于臨床樣本的快速、準確的檢測。
【學位授予單位】：內蒙古農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S852.65

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