本文關鍵詞：磷酸化鈣調蛋白轉錄因子在番茄花柄脫落過程中的表達及SR2L轉基因分析　出處：《沈陽農業(yè)大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：植物器官脫落是指植物體的某一部分脫離母體的過程,作為自然界普遍發(fā)生的現(xiàn)象,是植物對環(huán)境適應的重要手段之一。而在作物生產過程中,非正常的脫落過程,如果菜類蔬菜等花、果器官的脫落則是影響作物產量的重要因素。目前對脫落過程的調控機制仍不十分清楚。蛋白質磷酸化是一種翻譯后的修飾方式,在植物的生長發(fā)育過程中起著重要作用,且在植物器官脫落過程中發(fā)揮著重要調控作用。本論文在前期番茄花柄脫落過程中磷酸化蛋白鑒定的基礎上,選擇了鈣調蛋白轉錄因子家族作為研究對象,分析不同鈣調蛋白轉錄因子在脫落中的表達水平,并選取與脫落過程密切相關的鈣調蛋白轉錄因子,構建轉基因體系,為明確其在脫落過程中的調控作用奠定基礎。論文的主要研究結果如下:(1)以離體番茄花柄為試材,通過乙烯、1-MCP、Ca~(2+)、EGTA處理,調查了花柄脫落率,并對SR1L、SR2、SR2L、SR3、SR3L、SR4在不同時間表達量變化進行分析。結果表明,只有SR2L在基因水平變化不明顯。結合本課題組前期乙烯處理下不同花柄脫落時間離區(qū)的磷酸化肽分析結果,其磷酸化水平差異顯著,但翻譯和轉錄水平均變化不明顯,即SR2L的磷酸化作用與脫落過程密切相關。所以,從中選取磷酸化鈣調轉錄因子SR2L來對脫落過程中的磷酸化蛋白進行研究。(2)通過TA克隆載體pMD18-T的介導,將SR2L和SR2LSS914A基因與質粒相連,構建了啟動子為CaMV35S的表達載體pB7YWG2-SR2L,pB7YWG2-SR2LS914A。采用農桿菌介導法對番茄子葉進行侵染,經過篩選獲得抗性幼苗。本次實驗共獲得TO代植轉PB7YWG2-SR2L基因的陽性植株3株,轉pB7YWG2-SR2L S914A基因的陽性植株4株。TO代轉化率分別為2.9%,4.1%。(3)選擇515nm的激發(fā)波長,對得到的植株根部進行激光共聚焦檢測。結果發(fā)現(xiàn),與野生型"中蔬六號番茄"相比,轉基因植株的側根分生區(qū)細胞核區(qū)域中出現(xiàn)明顯的黃色熒光信號。所以將鈣調轉錄因子SR2L定位在番茄表皮的細胞核中。分別對TO以及T1代植株PCR檢測、進行qRT-PCR檢測、激光共聚焦檢測,表明目的基因已經成功整合到番茄基因組中,并在轉錄水平上得到了鑒定。(4)通過結合磷酸酶抑制劑處理對番茄離體花柄外植體脫落的影響以及對T1代轉pB7YWG2-SR2LS914A植株脫落情況。本試驗得出兩個推測:經過激光共聚焦試驗將SR2L定位于細胞核內,SR2L有可能是在細胞核內與EIN2結合,發(fā)生了去磷酸化的作用,從而調控EIN3的應答;SR2L也可能直接與EIN3的啟動子區(qū)域結合來參與乙烯調控的脫落反應。
【學位授予單位】：沈陽農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S641.2

【參考文獻】

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本文編號：1321181