本文關鍵詞：PTHLH在雞卵泡發(fā)育中的功能、表達調(diào)控及其與產(chǎn)蛋性能的關系

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【摘要】：甲狀旁腺激素樣激素(PTHLH)最初被認為是引起惡性腫瘤伴發(fā)的體液高鈣血癥的主要原因,能通過自分泌、旁分泌、細胞內(nèi)分泌等方式起作用,生物學功能涉及鈣轉運、骨形成、平滑肌收縮、細胞增殖分化等多個方面。PTHLH與PTH共用一個G蛋白偶聯(lián)受體PTH1R,該受體在進化過程中高度保守。實驗室前期對雞SY卵泡進行了轉錄組測序,發(fā)現(xiàn)雞FSHR的mRNA表達水平高的SY卵泡中,PTHLH基因的mRNA水平也升高,推測其可能參與卵泡選擇。本實驗研究了PTHLH及其受體PTH1R在雞卵巢卵泡中的表達調(diào)控,鑒定了PTHLH啟動子區(qū)的多態(tài)性,并探索了多態(tài)性與雞產(chǎn)蛋性能之間的關系。我們首先通過5′-及3′-RACE確定了PTHLH在雞上主要表達NCBI上第一轉錄本。PTHLH與PTH1R mRNA表達一致,在等級前卵泡中表達量逐漸上升,在SY中達到最高,大黃卵泡(LY)中次之,在等級卵泡中表達量顯著下降;PTHLH主要在等級前卵泡的膜細胞和等級卵泡的顆粒細胞中表達,而PTH1R在卵泡發(fā)育各時期均在膜細胞中表達,他們蛋白水平的表達在各級卵泡及不同時期卵泡的顆粒細胞、膜細胞中的表達無顯著差異。PTHLH能刺激細胞增殖,并能促進未成熟卵泡中顆粒細胞的分化,通過刺激類固醇激素合成相關酶如StAR、CYP11A1的產(chǎn)生,促進類固醇激素的產(chǎn)生。用FSH處理原代雞卵泡顆粒細胞、膜細胞,發(fā)現(xiàn)PTHLH的mRNA在等級前卵泡的膜細胞及等級卵泡的顆粒細胞中表達量升高。我們進一步檢測了PTHLH的啟動子活性,在確定的兩個關鍵調(diào)控區(qū)各檢測到一個SNP:rs72520524(CT)和rs72518862(AG),兩個SNP完全連鎖不平衡,雜合基因型AG和CT以及雙倍型AC/GT對應雞更早的開產(chǎn)日齡及更多的32周產(chǎn)蛋數(shù)。每個SNP均位于一個轉錄因子的結合位點,兩個轉錄因子共同作用,受FSH調(diào)控,作用于PTHLH轉錄。EMSA實驗確定CT(rs72520524)包含于AP-1結合位點,但AG(rs72518862)不包含于NF-κB結合位點中。綜上所述,我們的研究首次提出了PTHLH在雞卵泡中的表達調(diào)控,并鑒定了其啟動子區(qū)的多態(tài)性。雞PTHLH受FSH調(diào)控,通過調(diào)節(jié)細胞增殖、分化,及類固醇的生成在卵泡選擇過程中起重要作用。PTHLH基因啟動子區(qū)的兩個多態(tài)性位點,通過影響轉錄因子AP-1等的結合,影響對FSH的應答和雞的產(chǎn)蛋性能。
【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S831

【參考文獻】

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1 李園園;郭磊;盧晟盛;韓之明;;甲狀旁腺激素樣激素在胚胎發(fā)育中的作用[J];遺傳;2014年09期

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本文編號：1306843