本文關鍵詞：藍莓類擬盤多毛孢病菌鑒定及生物學特性研究

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【摘要】：類擬盤多毛孢真菌(Pestalotiopsis-like fungi)引起的病害是藍莓生產中的重要病害之一,造成減產和經濟損失。隨著藍莓種植不斷地向新的地區(qū)發(fā)展,不同的種植環(huán)境也造成了病害發(fā)生的多樣性。鑒于我國藍莓品種的差異性,種植條件的復雜性以及類擬盤多毛孢真菌的多樣性,推測在不同種植環(huán)境下為害藍莓的類擬盤多毛孢真菌種類亦有所區(qū)別。為明確為害我國藍莓的類擬盤多毛孢真菌的種類,并為此類真菌病害的防治提供理論基礎,本研究采用形態(tài)學和分子生物學技術相結合的方法,對分離自藍莓的類擬盤多毛孢真菌進行鑒定,并對其生物學特性進行研究。1.類擬盤多毛孢真菌形態(tài)學鑒定2013年-2016年,在我國11個藍莓主要產區(qū)采集藍莓葉斑病、枝枯病等病害樣品,經過分離純化及致病性測定,得到類擬盤多毛孢菌株共53株,其中7株無致病力,46株具有致病力,且致病力存在明顯分化。葉斑病病害癥狀表現(xiàn)為初期病斑呈黃褐色,圓形或近圓形,隨病斑擴展,病斑邊緣出現(xiàn)深褐色暈圈,后期部分葉片病斑上產生黑色分生孢子盤。枝枯病癥狀表現(xiàn)為初期病斑呈褐色,隨病斑擴展,病斑邊緣有深褐色暈圈,部分葉片和枝梢變褐枯死,后期整枝枯死,傷口處產生黑色分生孢子盤。對類擬盤多毛孢病菌進行菌落培養(yǎng)性狀的觀察,并制作徒手切片、冷凍切片、臨時裝片進行分生孢子、產孢細胞等形態(tài)特征的觀察。結果顯示各供試菌株菌落形態(tài)多樣:多數(shù)為白色,有或無輪紋,子實體均為黑色,分布密集或稀疏。分生孢子均包含5個細胞,中間3個細胞著色,兩端細胞無色透明,具有2根或2根以上的頂端附屬絲,基部附屬絲1根或2根,各菌株的分生孢子形態(tài)存在差異。按照中間色胞顏色、產孢細胞形態(tài)及分生孢子梗的有無可分為2個類群:(1)Pestalotiopsis屬,分生孢子中間色胞同色,產孢細胞無色透明,壁薄,光滑,分生孢子梗明顯;(2)Neopestalotiopsis屬,分生孢子中間色胞異色,產孢細胞無色透明,壁薄,光滑,分生孢子梗模糊。2.類擬盤多毛孢病菌分子鑒定本研究采用最大簡約法(MaximumParsimony,MP)和貝葉斯法(Bayesian Inference,BI)對供試菌株核糖體大亞基(Large Ribosomal Subunit,LSU)基因進行分析,對類擬盤多毛孢病菌進行屬的區(qū)分,并采用最大似然法(Maximum Likelihood,ML)和最大簡約法(Maximum Parsimony,MP)對聯(lián)合 rDNA-ITS、β-tubulin 和 tef1 基因進行分析,區(qū)分不同的種,同時結合形態(tài)學特征進行鑒定。鑒定結果顯示,為害我國藍莓產區(qū)的類擬盤多毛孢真菌主要為Neopestalotiopsis屬和Pestalotiopsis屬真菌。其中,N.chrysea是引起我國福建長汀藍莓枝枯病的病原菌,P.trachicarpicola是引起我國廣西桂林藍莓葉斑病的病原菌。綜合致病性測定結果可以得出Neopestalotiopsis和Pestalotiopsios屬部分真菌均可侵染藍莓葉片和枝條,引起葉斑病和枝枯病。3.類擬盤多毛孢病菌生物學特性研究通過對不同類群代表菌株進行生物學特性研究,結果顯示不同類群的生物學特性存在一定差異。葡萄糖為類擬盤多毛孢真菌菌絲生長的最適碳源;硝酸鈉為N.chrysea菌絲生長的最適氮源,甘氨酸為P.trachicarpicola菌絲生長的最適氮源;PDA為類擬盤多毛孢真菌菌絲生長的最適培養(yǎng)基;供試菌株在10 ℃-30℃范圍內均能夠生長,適宜生長溫度均為25 ℃-28℃,光照條件對供試菌株的菌絲生長快慢影響不明顯;供試菌株在pH為4-9范圍內均能夠生長,N.chrysea菌絲最適pH為8,SCCD01Cb(Neopestalotiopsis sp.)適宜 pH 為 5-6,P.trachicarpicola最適 pH 為 4,YN06F(Pestalotiopsis sp.)最適 pH為6。
【學位授予單位】：沈陽農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S436.639

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本文編號：1306378