發(fā)布時間：2017-10-03 07:16

  本文關鍵詞：UBE2Q1的異常表達與肝細胞肝癌發(fā)生發(fā)展的相性研究

  更多相關文章： UBE2Q1 肝細胞肝癌 細胞增殖 p53 細胞周期

【摘要】：目的:肝細胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常見的癌癥之一。有研究報道,泛素蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin-proteasome system,UPS)參與了蛋白質降解的調控,在HCC以及其他惡性腫瘤的病理生理學過程中扮演著關鍵角色。泛素接合酶E2Q1(ubiquitin-conjugating enzyme E2Q1,UBE2Q1)作為一種E2泛素接合酶類,可能參與了癌癥相關蛋白的調控。本研究旨在分析UBE2Q1在HCC中的表達情況及其與HCC患者預后的關系,并進一步探討UBE2Q1的異常表達在HCC發(fā)生發(fā)展過程中的意義。方法:1.從組織學角度研究,首先通過Western blot方法,檢測在8對新鮮HCC及其對應的癌旁組織中UBE2Q1蛋白的表達情況;然后,運用免疫組化方法檢測86例HCC組織標本中UBE2Q1和增殖指標Ki-67的表達情況,并采用統(tǒng)計學方法分析UBE2Q1、Ki-67的表達情況與HCC癌患者的性別、年齡、腫瘤體積大小、組織學分級以及腫瘤轉移等臨床病理因素之間的相關性。通過Kaplan-Meier法分析UBE2Q1的表達與HCC患者生存率之間的相關性;運用單因素和Cox危險比例模型多因素分析進一步探究UBE2Q1的表達與肝細胞肝癌患者預后之間的關系。2.從細胞學角度研究,選取高表達UBE2Q1的BEL-7404、Hep G2細胞株作為研究對象,血清饑餓釋放同步化處理后運用Western blot方法檢測UBE2Q1蛋白表達水平變化,探究其在腫瘤細胞增殖過程中的潛在作用。3.從分子生物學角度研究,通過小干擾RNA的方式下調BEL-7404、Hep G2細胞中UBE2Q1的內源性表達,然后采用CCK-8、細胞流式分析等方法檢測UBE2Q1表達的下調對細胞增殖以及細胞周期的影響。結果:1.免疫組化及Western blot法檢測均顯示,UBE2Q1在HCC組織中的表達明顯高于相對應的癌旁肝組織。統(tǒng)計學分析提示UBE2Q1的表達強度與HCC組織學分級(P0.001)之間的關系有統(tǒng)計學意義,相關性分析表明UBE2Q1與Ki-67表達呈正相關(r=0.639,P0.01);Kaplan-Meier分析顯示UBE2Q1在HCC中的高表達與患者總生存率的降低顯著相關(P=0.001);單因素分析表明UBE2Q1與HCC患者的不良預后有關(P0.001);Cox比例風險模型分析顯示UBE2Q1可做為HCC患者預后的一種獨立指標(P=0.002)。2.通過血清饑餓的方式使BEL-7404、Hep G2細胞生長周期停滯,血清釋放后刺激BEL-7404、Hep G2細胞增殖;Western blot結果顯示UBE2Q1PCNA蛋白隨著細胞周期的進展表達增加,而p53、p21蛋的白表達卻下降。3.si RNA分析顯示,UBE2Q1表達的下調可引起B(yǎng)EL-7404、Hep G2細胞增殖水平的下降及其細胞周期的停滯。結論:1.UBE2Q1在HCC中高表達,并且可作為HCC患者一種獨立的預后指標。UBE2Q1的高表達提示HCC患者的預后不良。上述結果均說明UBE2Q1可能與HCC的發(fā)生發(fā)展有關。2.UBE2Q1的表達在血清饑餓的BEL-7404、Hep G2細胞中逐漸增加,提示UBE2Q1與HCC細胞的增殖過程相關。si RNA干擾BEL-7404、Hep G2細胞中UBE2Q1的內源性表達后,p53、p21在BEL-7404、Hep G2細胞中的表達水平相應增加,提示UBE2Q1的表達下調可能通過使HCC細胞周期停滯來影響其增殖。
【關鍵詞】：UBE2Q1 肝細胞肝癌 細胞增殖 p53 細胞周期
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 緒論11-14
• 1.1 課題來源、研究的目的和意義11-12
• 1.2 國內外研究概況12-13
• 1.2.1 國外研究概況12-13
• 1.2.2 國內研究概況13
• 1.3 論文的主要研究內容13-14
• 第二章 材料和方法14-25
• 2.1 材料14-19
• 2.1.1 組織標本14
• 2.1.2 細胞14
• 2.1.3 試劑14-18
• 2.1.4 實驗儀器18-19
• 2.2 方法19-25
• 2.2.1 Western blot檢測19-20
• 2.2.2 病理切片的免疫組化20-23
• 2.2.3 細胞株的培養(yǎng)23
• 2.2.4 UBE2Q1 基因的si-RNA質粒23
• 2.2.5 利用脂質體Lipofectamine 2000 瞬時轉染HepG2 和BEL-7404 細胞23-24
• 2.2.6 流式細胞儀（FCM）檢測細胞周期的分布24
• 2.2.7 CCK-8（cell counting kit-8）法檢測細胞增殖活性24-25
• 第三章 結果25-42
• 3.1 UBE2Q1 在HCC組織及其對應癌旁組織中的表達25-27
• 3.1.1 Western blot檢測UBE2Q1 在8對HCC及其對應癌旁新鮮組織中的表達情況25-26
• 3.1.2 免疫組化檢測UBE2Q1 和Ki-67 在HCC及其對應癌旁石蠟切片組織中的表達情況26
• 3.1.3 UBE2Q1 和Ki-67 在HCC組織中表達的相關性分析26-27
• 3.2 UBE2Q1 的表達與HCC臨床病理因素的相關性27-29
• 3.3 HCC預后相關統(tǒng)計學分析29-31
• 3.3.1 單因素生存分析29-30
• 3.3.2 UBE2Q1 的表達對HCC患者生存率的影響30
• 3.3.3 Cox比例風險模型多因素生存分析30-31
• 3.4 UBE2Q1 在肝細胞肝癌細胞株及正常肝細胞株中的表達31-32
• 3.5 UBE2Q1 對HepG2 細胞株增殖的影響32-37
• 3.5.1 血清饑餓釋放對HepG2 細胞株細胞周期的影響32-33
• 3.5.2 HepG2 細胞增殖過程中UBE2Q1 表達的變化33-34
• 3.5.3 UBE2Q1 表達的下調對于HepG2 細胞株細胞增殖的影響34-36
• 3.5.4 UBE2Q1 表達的下調對HepG2 細胞株細胞周期及其相關蛋白的影響36-37
• 3.6 UBE2Q1 對BEL-7404 細胞株增殖的影響37-42
• 3.6.1 血清饑餓釋放對BEL-7404 細胞株細胞周期的影響37-38
• 3.6.2 BEL-7404 細胞增殖過程中UBE2Q1 表達的變化38-39
• 3.6.3 UBE2Q1 表達的下調對于BEL-7404 細胞株細胞增殖的影響39-40
• 3.6.4 UBE2Q1 表達的下調對BEL-7404 細胞株細胞周期及其相關蛋白的影響40-42
• 第四章 討論42-46
• 第五章 結論46-47
• 參考文獻47-53
• 綜述53-86
• 參考文獻71-86
• 在攻讀博士學位期間公開發(fā)表的論文與參加的項目86-87
• 英文縮寫詞表87-90
• 致謝90-91

【相似文獻】

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本文編號：963859