發(fā)布時間：2023-05-20 10:00

　　目的:1.篩選前列腺癌EpCAM特異性核酸適配子Aptamer,驗(yàn)證其對EpCAM陽性的前列腺癌細(xì)胞的親和性。2.將EpCAM特異性Aptamer與活性促凋亡分子tBid共偶聯(lián)GoldMag金磁納米微粒,構(gòu)建分子探針Aptamer^EpCAM-GoldMag-tBid,驗(yàn)證分子探針對EpCAM陽性前列腺癌細(xì)胞的親和性及靶向促凋亡活性。3.構(gòu)建前列腺癌荷瘤裸鼠模型,在體內(nèi)外水平分別驗(yàn)證分子探針Aptamer^EpCAM-GoldMag-tBid特異性靶向殺傷前列腺癌組織細(xì)胞的生物活性及其MR成像能力。方法:1.用流式細(xì)胞術(shù)和Western Blot分別檢測三種人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3、DU145和LNCaP的EpCAM表達(dá)水平。2.設(shè)計隨機(jī)單鏈DNA文庫和上、下游引物。將慢病毒表達(dá)載體pCDH-EpCAM轉(zhuǎn)染工程細(xì)胞人源胚胎腎細(xì)胞HEK293T,并以該轉(zhuǎn)染細(xì)胞為靶標(biāo),利用細(xì)胞SELEX技術(shù)篩選EpCAM特異性Aptamer,經(jīng)過12輪體外篩選,對得到的DNA產(chǎn)物行克隆和測序鑒定,最終得到Ep1和Ep2兩條DNA序列作為目的Aptamer序列。3.用...

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
Abstract
前言
文獻(xiàn)回顧
實(shí)驗(yàn)一 前列腺癌EpCAM核酸適配子的篩選及鑒定
    1 材料
        1.1 細(xì)胞系
        1.2 菌種與質(zhì)粒
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器
        1.5 主要溶液的配制
    2 方法
        2.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測前列腺癌細(xì)胞EpCAM的表達(dá)情況
        2.2 Western Blot檢測前列腺癌細(xì)胞EpCAM的表達(dá)情況
        2.3 細(xì)胞SELEX篩選的引物設(shè)計與合成
        2.4 前列腺癌EpCAM核酸適配子的細(xì)胞SELEX篩選
        2.5 目的DNA的克隆、測序與合成
        2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測EpCAM核酸適配子的特異性
        2.7 免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測EpCAM核酸適配子的特異性
    3 結(jié)果
        3.1 檢測前列腺癌細(xì)胞EpCAM的表達(dá)情況
        3.2 前列腺癌EpCAM核酸適配子的細(xì)胞SELEX篩選
        3.3 前列腺癌EpCAM核酸適配子的DNA測序鑒定
        3.4 前列腺癌EpCAM核酸適配子的特異性鑒定
    4 討論
實(shí)驗(yàn)二 前列腺癌特異性分子探針Aptamer ^EpCAM-GoldMag-tBid的構(gòu)建及其體外活性鑒定
    1 材料
        1.1 細(xì)胞系
        1.2 蛋白制品
        1.3 核酸適配子
        1.4 主要試劑
        1.5 主要儀器
        1.6 主要溶液的配制
    2 方法
        2.1 檢測核酸適配子和tBid蛋白在金磁納米微粒表面的偶聯(lián)效率
        2.2 分子探針Aptamer^EpCAM-GoldMag-tBid的構(gòu)建
        2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測分子探針的細(xì)胞特異性
        2.4 免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測分子探針的細(xì)胞特異性
        2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測分子探針體外殺傷EpCAM陽性細(xì)胞的能力
    3 結(jié)果
        3.1 檢測核酸適配子和tBid蛋白在金磁納米微粒表面的偶聯(lián)效率
        3.2 檢測分子探針的細(xì)胞特異性
        3.3 檢測分子探針體外殺傷EpCAM陽性細(xì)胞的能力
    4 討論
實(shí)驗(yàn)三 分子探針Ep1-GoldMag-tBid對前列腺癌的MR特異性成像及其體內(nèi)生物活性鑒定
    1 材料
        1.1 細(xì)胞系
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 主要溶液的配制
    2 方法
        2.1 分子探針Ep1-GoldMag-tBid對前列腺癌細(xì)胞的MR特異性成像
        2.2 前列腺癌荷瘤裸鼠模型的構(gòu)建
        2.3 檢測EpCAM在前列腺癌荷瘤裸鼠腫瘤及重要臟器組織中的表達(dá)
        2.4 組織免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測分子探針Ep1-GoldMag-tBid的腫瘤組織特異性
        2.5 分子探針Ep1-GoldMag-tBid在體實(shí)驗(yàn)分組及用藥方案
        2.6 HE染色觀察分子探針Ep1-GoldMag-tBid對裸鼠正常重要臟器的影響
        2.7 前列腺癌荷瘤裸鼠MR特異性成像
    3 結(jié)果
        3.1 分子探針Ep1-GoldMag-tBid對前列腺癌細(xì)胞的MR特異性成像
        3.2 前列腺癌荷瘤裸鼠模型的構(gòu)建
        3.3 檢測EpCAM在前列腺癌荷瘤裸鼠腫瘤及重要臟器組織中的表達(dá)
        3.4 檢測分子探針Ep1-GoldMag-tBid的腫瘤組織特異性
        3.5 檢測分子探針Ep1-GoldMag-tBid在體抗腫瘤特性
        3.6 分子探針Ep1-GoldMag-tBid對前列腺癌荷瘤裸鼠的MR特異性成像
    4 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
個人簡歷和研究成果
致謝



本文編號：3820915