目的:檢測口腔扁平苔蘚(OLP)患者頰黏膜表面菌群變化,研究具核梭桿菌對角質(zhì)形成細胞TLR4/NF-κB通路的影響。方法:(1)收集健康對照與OLP患者頰黏膜樣本,高通量技術(shù)檢測細菌16S rRNA基因,篩選出對照組與OLP組之間頰黏膜表面差異最明顯的菌屬。(2)real-time PCR技術(shù)驗證16S測序結(jié)果。其次,收集OLP患者損害與非損害黏膜樣本,檢測16S測序篩選出的細菌表達水平。最后,收集OLP患者與對照頰黏膜組織,檢測組織內(nèi)細菌表達。原位雜交技術(shù)檢測OLP患者頰黏膜內(nèi)細菌存在。(3)體外培養(yǎng)人正�？谇唤琴|(zhì)形成細胞,并使用具核梭桿菌(ATCC25586)感染細胞。在感染后不同時間點檢測細胞增殖、IL-1β、IL-6與TNF-α表達,以及細胞TLR4/NF-κB表達。結(jié)果:(1)16S測序發(fā)現(xiàn):(1)屬水平,與對照組比較,梭桿菌、顆粒鏈球、消化鏈球菌與小單胞菌屬在OLP組豐度增加。(2)線性判別分析發(fā)現(xiàn):對組間差異影響最大的菌屬是梭桿菌與顆粒鏈菌。(2)real-time PCR發(fā)現(xiàn),與非損害區(qū)域比較,具核梭桿菌在OLP黏膜損害表面表達升高(P=0.001﹤0.01)。在白紋型...

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 口腔扁平苔蘚損害表面菌群改變及其與臨床類型的關(guān)系
    材料與方法
        1.1 材料
        1.2 實驗方法
    結(jié)果
        2.1 優(yōu)質(zhì)序列(quality control reads,Q-C 序列)長度分析
        2.2 稀釋曲線
        2.3 α多樣性分析
        2.4 健康對照組與OLP組菌群結(jié)構(gòu)分析
        2.5 線性判別分析健康對照組與OLP患者組之間差異菌屬
        2.6 PICRUSt 菌群基因功能預(yù)測
    討論
    小結(jié)
第二部分 口腔扁平苔蘚損害表面具核梭桿菌的鑒定及其與損害的相關(guān)性
    材料與方法
        1.1 材料
        1.2 實驗方法
    結(jié)果
        2.1 real-time PCR技術(shù)驗證本研究第一部分16SrRNA 基因測序結(jié)果
        2.2 25 例 OLP 患者損害與非損害黏膜表面細菌與具核梭桿菌表達水平的自身對照研究
        2.3 回顧性分析 20 例 OLP 患者與 10 例健康對照黏膜組織內(nèi)細菌與具核梭桿菌的表達水平
        2.4 原位雜交技術(shù)檢測 OLP 患者頰黏膜組織內(nèi)細菌存在
    討論
    小結(jié)
第三部分 具核梭桿菌對人正常口腔角質(zhì)形成細胞TLR4/NF-κB通路及其相關(guān)細胞因子表達的影響
    材料與方法
        1.1 材料
        1.2 角質(zhì)形成細胞與具核梭桿菌
        1.3 BHI肉湯與主要試劑的配制
        1.4 方法
    結(jié)果
        2.1 具核梭桿菌的培養(yǎng)與鑒定
        2.2 角質(zhì)形成細胞的鑒定
        2.3 具核梭桿菌促進了角質(zhì)形成細胞的增殖
        2.4 具核梭桿菌對角質(zhì)形成細胞分泌促炎因子的影響
        2.5 具核梭桿菌增強了角質(zhì)形成細胞 TLR4 蛋白與磷酸化 NF-κB p65 蛋白表達
        2.6 具核梭桿菌促進了角質(zhì)形成細胞TLR4 基因的表達
        2.7 口腔扁平苔蘚患者頰黏膜組織關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的分析
    討論
    小結(jié)
全文總結(jié)
創(chuàng)新之處
參考文獻
致謝
在讀期間發(fā)表的論文或主持課題



本文編號：3767899