目的Caspase依賴的細(xì)胞凋亡是細(xì)胞死亡很重要的方式,同時(shí)也是多種抗腫瘤治療共同激活的效應(yīng)途徑。Caspase-8作為起始的凋亡蛋白已經(jīng)廣為人知,但是最近很多研究發(fā)現(xiàn)了caspase-8還有其他的功能。細(xì)胞死亡是一個(gè)多細(xì)胞器參與的生命活動(dòng),細(xì)胞通過各種方式相互調(diào)節(jié),來清除已經(jīng)發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的損害的細(xì)胞。溶酶體,作為細(xì)胞回收中心,為腫瘤細(xì)胞活躍代謝提供物質(zhì)基礎(chǔ)。快速的分裂和侵襲的癌細(xì)胞嚴(yán)重依賴有效的溶酶體功能,除此之外,富含蛋白水解酶的溶酶體也輔助參與細(xì)胞死亡過程。本研究探究了與腫瘤細(xì)胞存亡相關(guān)的caspase-8的非凋亡的功能,通過阻斷正反饋的級(jí)聯(lián)放大的凋亡作用,尋找其新的死亡機(jī)制。探求其與溶酶體穩(wěn)態(tài)失衡的關(guān)系,溶酶體功能失調(diào)的表現(xiàn)以及調(diào)控方式,caspase-8如何協(xié)同溶酶體促進(jìn)腫瘤細(xì)胞死亡的分子機(jī)制,為腫瘤治療提供新的策略。最后為caspase-8衍生短肽靶向溶酶體治療提供理論基礎(chǔ)。方法1.本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù),在腫瘤細(xì)胞的基因?qū)用嫔弦灰磺贸枰芯康腸aspase蛋白,并通過基因組測(cè)序,蛋白水平,以及功能層面上驗(yàn)證敲除的有效性,消除了Knock down所導(dǎo)致的微... 

【文章頁(yè)數(shù)】：124 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

HeLa敲除細(xì)胞的驗(yàn)證敲除的HeLa細(xì)胞系在50ng/mlTNF-α聯(lián)合10ug/mlCHX刺激20小時(shí)后，顯微鏡觀察拍照(a)，檢測(cè)細(xì)胞存活(b)；（c）Westernblot檢測(cè)HeLa敲除細(xì)胞系蛋白水平的表達(dá)；（d）敲除的HeLa細(xì)胞系在10μMABT737刺激30小時(shí)，檢測(cè)細(xì)

MCF-7敲除細(xì)胞的驗(yàn)證（a）敲除caspase-7的MCF-7細(xì)胞系在50ng/mlTNF-α刺激20小時(shí)，檢測(cè)細(xì)胞

在HeLa以及MCF-7中，保護(hù)線粒體可以抵抗外源凋亡刺激Westernblot驗(yàn)證穩(wěn)定降表達(dá)Bid和Bax細(xì)胞系，蛋白表達(dá)情況：HeLa(a)，MCF-7（c）;（b）上述HeLa降表達(dá)細(xì)胞系在50ng/mlTNF-α聯(lián)合10ug/mlCHX刺激12小時(shí)后的細(xì)胞存活；（d）穩(wěn)定過表達(dá)Bcl-2以及Bcl-xL的MCF-7細(xì)胞系兩種

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)胞自噬與凋亡的交互作用[J]. 付晶晶,段君凱,李紅.  生命的化學(xué). 2014(05)



本文編號(hào)：3708242