復(fù)方龍星片對(duì)煙霧聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)COPD大鼠的作用及機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間:2021-12-22 17:52
目的COPD是一種常見的、可以預(yù)防和治療的疾病,其死亡率高,嚴(yán)重危害人類健康。復(fù)方龍星片為根據(jù)全國(guó)名老中醫(yī)黃吉賡處方制備而來的曙光醫(yī)院院內(nèi)制劑,臨床治療COPD療效顯著,但其作用機(jī)制尚不明確。本研究對(duì)其機(jī)制進(jìn)行了探討。方法(1)將Wistar大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、龍星片低、中、高劑量組、陽性沙丁胺醇和地塞米松組,煙熏4周后開始給藥干預(yù)直至處死,煙熏12周后氣管滴注脂多糖溶液,煙熏16周后全部處死,檢測(cè)肺功能,取肺組織HE、Masson染色觀察氣道病理及形態(tài),ELISA測(cè)血清炎癥因子IL-8、TNF-α、LTB4水平,生化法測(cè)氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白MDA、SOD、GSH/GSSG水平。(2)基于Illumina hiseq平臺(tái),對(duì)空白、模型、龍星片組大鼠肺組織在某個(gè)時(shí)期轉(zhuǎn)錄出來的所有m RNA進(jìn)行測(cè)序,完成原始數(shù)據(jù)質(zhì)控、轉(zhuǎn)錄組整體質(zhì)量的評(píng)估后,分析表達(dá)量,對(duì)樣本兩兩間比較,以FDR<0.05&|log2FC|≥1為標(biāo)準(zhǔn),篩選顯著差異表達(dá)基因,對(duì)其進(jìn)行GO功能注釋分類、富集分析、KEGG通路富集分析及剪切分析。(3)參考藥效結(jié)果以“inflammatory response”...
【文章來源】:上海中醫(yī)藥大學(xué)上海市
【文章頁數(shù)】:113 頁
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【文章目錄】:
主要縮略詞表
摘要
Abstract
引言
第一章 復(fù)方龍星片對(duì)COPD大鼠的藥理作用
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑
1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 動(dòng)物分組與處理
2.2 動(dòng)物造模
2.3 肺功能檢測(cè)
2.4 收集血清及BALF
2.5 肺組織病理切片與染色
2.6 肺組織病理學(xué)觀察及形態(tài)定量分析
2.7 支氣管形態(tài)學(xué)測(cè)量
2.8 炎癥因子IL-8、TNF-α、LTB4 水平的測(cè)定
2.9 氧化應(yīng)激水平蛋白MDA、SOD、GSH/GSSG含量的測(cè)定
2.10 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果
3.1 狀態(tài)觀察
3.2 肺功能指標(biāo)
3.3 氣道病理變化觀察
3.4 肺組織病理學(xué)觀察及分析結(jié)果
3.5 支氣管形態(tài)學(xué)測(cè)量結(jié)果
3.6 炎癥因子IL-8、TNF-α、LTB4 的測(cè)定結(jié)果
3.7 氧化應(yīng)激水平蛋白MDA、SOD、GSH/GSSG的測(cè)定結(jié)果
4 討論
第二章 復(fù)方龍星片防治COPD大鼠的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序研究
1 儀器與試劑
1.1 儀器
1.2 試劑
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 樣本的選擇
2.2 測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程
2.3 信息分析流程
3 結(jié)果
3.1 原始測(cè)序數(shù)據(jù)說明
3.2 原始測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)控
3.3 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量剪切及統(tǒng)計(jì)
3.4 與參考基因組比對(duì)
3.5 轉(zhuǎn)錄組整體質(zhì)量評(píng)估
3.6 表達(dá)量分析
3.7 樣本間表達(dá)量評(píng)估
3.8 表達(dá)差異分析
3.9 差異基因表達(dá)模式聚類
3.10 venn圖
3.11 差異基因GO分類統(tǒng)計(jì)及富集分析
3.12 差異基因KEGG通路富集分析
3.13 可變剪切分析
4、討論
第三章 復(fù)方龍星片防治COPD大鼠靶基因的預(yù)測(cè)及驗(yàn)證
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 試劑及抗體
1.2 主要儀器及耗材
2 方法
2.1 基因功能為主因素的篩選
2.2 基因組間差異值為主因素的篩選
2.3 Real-time PCR檢測(cè)篩選基因m RNA的變化
2.4 Western blot檢測(cè)侯選靶基因蛋白的表達(dá)
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 龍星片功能基因的主要參與過程及基因數(shù)量
3.2 顯著表達(dá)功能基因的文獻(xiàn)檢索結(jié)果
3.3 功能為主因素預(yù)測(cè)靶基因的篩選結(jié)果
3.4 表達(dá)差異為主因素預(yù)測(cè)靶基因的篩選結(jié)果
3.5 篩選基因擴(kuò)增結(jié)果
3.6 篩選基因RT-PCR檢測(cè)結(jié)果
3.7 預(yù)測(cè)靶基因Western-blot檢測(cè)結(jié)果
3.8 龍星片防治COPD作用靶基因的分析及信號(hào)途徑的預(yù)測(cè)
4 討論
第四章 以靶基因?yàn)閷?dǎo)向的藥效成分的篩選及定量
1 材料
1.1 儀器
1.2 試藥
2 方法與結(jié)果
2.1 復(fù)方龍星片處方藥材所含化學(xué)成分的統(tǒng)計(jì)
2.2 以靶基因?yàn)閷?dǎo)向的藥效成分的篩選
2.3 復(fù)方龍星片藥效成分的定量-指紋圖譜研究
3 結(jié)論
4 討論
創(chuàng)新點(diǎn)
全文小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄一 文獻(xiàn)綜述 慢性阻塞性肺疾病發(fā)病機(jī)制研究概況
參考文獻(xiàn)
附錄二 在讀期間論文發(fā)表及專利申請(qǐng)情況
附錄三 攻讀博士學(xué)位期間成果
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]中醫(yī)藥防治慢性阻塞性肺疾病炎癥反應(yīng)相關(guān)信號(hào)通路的研究進(jìn)展[J]. 謝文英,包永生,王俊月,尚立芝,王肖艷,李亮,張良芝,包海燕,宋倩紅. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2019(23)
[2]夏枯草的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與次生代謝產(chǎn)物生物合成相關(guān)基因的挖掘[J]. 朱畇昊,張夢(mèng)佳,李璐,趙樂,董誠明. 中草藥. 2019(05)
[3]金線蓮轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及其黃酮類合成相關(guān)基因分析[J]. 鄒福賢,許文,黃澤豪,張勛,陳抒云,林羽,徐偉. 中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(01)
[4]中藥藥效物質(zhì)篩選與辨識(shí)的研究思路及進(jìn)展[J]. 畢肖林,馬世堂,狄留慶,陳志鵬,劉陶世. 中草藥. 2018(22)
[5]基因芯片與高通量測(cè)序技術(shù)的原理與應(yīng)用的比較[J]. 徐曉麗,林娟,鄢仁祥. 中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2018(11)
[6]傳統(tǒng)藥用植物轉(zhuǎn)錄組研究進(jìn)展[J]. 李慧,馬德志,姜明,劉溪,陳曉婷,劉振艷. 中醫(yī)藥信息. 2018(06)
[7]慢性阻塞性肺疾病動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J]. 張迪,管宇,夏藝,范麗,劉士遠(yuǎn). 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(03)
[8]芪蛭益肺顆粒對(duì)慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的治療作用及機(jī)制研究[J]. 楊容芳,余豐君,李嘉萌,馮淬靈,張淑靜,王晶. 世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化. 2018(02)
[9]中醫(yī)證候的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究進(jìn)展與探析[J]. 何浩強(qiáng),陳光,高嘉良,王階. 世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化. 2018(01)
[10]慢性阻塞性肺疾病呼吸康復(fù)與炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激的研究進(jìn)展[J]. 郭炳鵬,周露茜,關(guān)力理,陳榮昌. 中華結(jié)核和呼吸雜志. 2017 (12)
博士論文
[1]載布洛芬防黏連膜的療效和機(jī)制研究[D]. 陳華.蘇州大學(xué) 2017
[2]基于比較基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)揭示單增李斯特菌毒力因子的研究[D]. 王旭.上海海洋大學(xué) 2016
[3]應(yīng)用RNA-seq技術(shù)進(jìn)行盆腔器官脫垂不同時(shí)期轉(zhuǎn)錄組研究[D]. 謝若云.福建醫(yī)科大學(xué) 2015
[4]若干中藥組分對(duì)香煙煙霧暴露所致慢性阻塞性肺疾病炎癥反應(yīng)的作用及機(jī)制研究[D]. 李璐璐.復(fù)旦大學(xué) 2012
碩士論文
[1]甘藍(lán)型油菜種子老化處理后發(fā)芽指數(shù)QTL定位及生理分析[D]. 侯林濤.西南大學(xué) 2017
[2]COPD肺氣虛證大鼠肺組織結(jié)構(gòu)變化及愛羅咳喘寧方干預(yù)研究[D]. 劉坦.河南中醫(yī)藥大學(xué) 2016
本文編號(hào):3546824
【文章來源】:上海中醫(yī)藥大學(xué)上海市
【文章頁數(shù)】:113 頁
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【文章目錄】:
主要縮略詞表
摘要
Abstract
引言
第一章 復(fù)方龍星片對(duì)COPD大鼠的藥理作用
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑
1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 動(dòng)物分組與處理
2.2 動(dòng)物造模
2.3 肺功能檢測(cè)
2.4 收集血清及BALF
2.5 肺組織病理切片與染色
2.6 肺組織病理學(xué)觀察及形態(tài)定量分析
2.7 支氣管形態(tài)學(xué)測(cè)量
2.8 炎癥因子IL-8、TNF-α、LTB4 水平的測(cè)定
2.9 氧化應(yīng)激水平蛋白MDA、SOD、GSH/GSSG含量的測(cè)定
2.10 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果
3.1 狀態(tài)觀察
3.2 肺功能指標(biāo)
3.3 氣道病理變化觀察
3.4 肺組織病理學(xué)觀察及分析結(jié)果
3.5 支氣管形態(tài)學(xué)測(cè)量結(jié)果
3.6 炎癥因子IL-8、TNF-α、LTB4 的測(cè)定結(jié)果
3.7 氧化應(yīng)激水平蛋白MDA、SOD、GSH/GSSG的測(cè)定結(jié)果
4 討論
第二章 復(fù)方龍星片防治COPD大鼠的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序研究
1 儀器與試劑
1.1 儀器
1.2 試劑
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 樣本的選擇
2.2 測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程
2.3 信息分析流程
3 結(jié)果
3.1 原始測(cè)序數(shù)據(jù)說明
3.2 原始測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)控
3.3 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量剪切及統(tǒng)計(jì)
3.4 與參考基因組比對(duì)
3.5 轉(zhuǎn)錄組整體質(zhì)量評(píng)估
3.6 表達(dá)量分析
3.7 樣本間表達(dá)量評(píng)估
3.8 表達(dá)差異分析
3.9 差異基因表達(dá)模式聚類
3.10 venn圖
3.11 差異基因GO分類統(tǒng)計(jì)及富集分析
3.12 差異基因KEGG通路富集分析
3.13 可變剪切分析
4、討論
第三章 復(fù)方龍星片防治COPD大鼠靶基因的預(yù)測(cè)及驗(yàn)證
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 試劑及抗體
1.2 主要儀器及耗材
2 方法
2.1 基因功能為主因素的篩選
2.2 基因組間差異值為主因素的篩選
2.3 Real-time PCR檢測(cè)篩選基因m RNA的變化
2.4 Western blot檢測(cè)侯選靶基因蛋白的表達(dá)
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 龍星片功能基因的主要參與過程及基因數(shù)量
3.2 顯著表達(dá)功能基因的文獻(xiàn)檢索結(jié)果
3.3 功能為主因素預(yù)測(cè)靶基因的篩選結(jié)果
3.4 表達(dá)差異為主因素預(yù)測(cè)靶基因的篩選結(jié)果
3.5 篩選基因擴(kuò)增結(jié)果
3.6 篩選基因RT-PCR檢測(cè)結(jié)果
3.7 預(yù)測(cè)靶基因Western-blot檢測(cè)結(jié)果
3.8 龍星片防治COPD作用靶基因的分析及信號(hào)途徑的預(yù)測(cè)
4 討論
第四章 以靶基因?yàn)閷?dǎo)向的藥效成分的篩選及定量
1 材料
1.1 儀器
1.2 試藥
2 方法與結(jié)果
2.1 復(fù)方龍星片處方藥材所含化學(xué)成分的統(tǒng)計(jì)
2.2 以靶基因?yàn)閷?dǎo)向的藥效成分的篩選
2.3 復(fù)方龍星片藥效成分的定量-指紋圖譜研究
3 結(jié)論
4 討論
創(chuàng)新點(diǎn)
全文小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄一 文獻(xiàn)綜述 慢性阻塞性肺疾病發(fā)病機(jī)制研究概況
參考文獻(xiàn)
附錄二 在讀期間論文發(fā)表及專利申請(qǐng)情況
附錄三 攻讀博士學(xué)位期間成果
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]中醫(yī)藥防治慢性阻塞性肺疾病炎癥反應(yīng)相關(guān)信號(hào)通路的研究進(jìn)展[J]. 謝文英,包永生,王俊月,尚立芝,王肖艷,李亮,張良芝,包海燕,宋倩紅. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2019(23)
[2]夏枯草的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與次生代謝產(chǎn)物生物合成相關(guān)基因的挖掘[J]. 朱畇昊,張夢(mèng)佳,李璐,趙樂,董誠明. 中草藥. 2019(05)
[3]金線蓮轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及其黃酮類合成相關(guān)基因分析[J]. 鄒福賢,許文,黃澤豪,張勛,陳抒云,林羽,徐偉. 中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(01)
[4]中藥藥效物質(zhì)篩選與辨識(shí)的研究思路及進(jìn)展[J]. 畢肖林,馬世堂,狄留慶,陳志鵬,劉陶世. 中草藥. 2018(22)
[5]基因芯片與高通量測(cè)序技術(shù)的原理與應(yīng)用的比較[J]. 徐曉麗,林娟,鄢仁祥. 中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2018(11)
[6]傳統(tǒng)藥用植物轉(zhuǎn)錄組研究進(jìn)展[J]. 李慧,馬德志,姜明,劉溪,陳曉婷,劉振艷. 中醫(yī)藥信息. 2018(06)
[7]慢性阻塞性肺疾病動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J]. 張迪,管宇,夏藝,范麗,劉士遠(yuǎn). 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(03)
[8]芪蛭益肺顆粒對(duì)慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的治療作用及機(jī)制研究[J]. 楊容芳,余豐君,李嘉萌,馮淬靈,張淑靜,王晶. 世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化. 2018(02)
[9]中醫(yī)證候的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究進(jìn)展與探析[J]. 何浩強(qiáng),陳光,高嘉良,王階. 世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化. 2018(01)
[10]慢性阻塞性肺疾病呼吸康復(fù)與炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激的研究進(jìn)展[J]. 郭炳鵬,周露茜,關(guān)力理,陳榮昌. 中華結(jié)核和呼吸雜志. 2017 (12)
博士論文
[1]載布洛芬防黏連膜的療效和機(jī)制研究[D]. 陳華.蘇州大學(xué) 2017
[2]基于比較基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)揭示單增李斯特菌毒力因子的研究[D]. 王旭.上海海洋大學(xué) 2016
[3]應(yīng)用RNA-seq技術(shù)進(jìn)行盆腔器官脫垂不同時(shí)期轉(zhuǎn)錄組研究[D]. 謝若云.福建醫(yī)科大學(xué) 2015
[4]若干中藥組分對(duì)香煙煙霧暴露所致慢性阻塞性肺疾病炎癥反應(yīng)的作用及機(jī)制研究[D]. 李璐璐.復(fù)旦大學(xué) 2012
碩士論文
[1]甘藍(lán)型油菜種子老化處理后發(fā)芽指數(shù)QTL定位及生理分析[D]. 侯林濤.西南大學(xué) 2017
[2]COPD肺氣虛證大鼠肺組織結(jié)構(gòu)變化及愛羅咳喘寧方干預(yù)研究[D]. 劉坦.河南中醫(yī)藥大學(xué) 2016
本文編號(hào):3546824
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