發(fā)布時間：2021-11-13 11:21

　　細胞衰老是一種持久的細胞增殖停滯,但近期研究顯示細胞衰老在發(fā)育和組織再生中起著重要作用。最近的研究揭示,熱休克蛋白在調(diào)節(jié)肌肉再生中的重要作用。熱休克蛋白Hsp90（Heat shock protein 90 KDa,Hsp90）有兩個亞型:誘導(dǎo)表達亞型Hsp90α和持續(xù)表達亞型Hsp90β。本論文發(fā)現(xiàn)Hsp90β在肌肉再生過程中表達上調(diào),而Hsp90α表達水平在肌肉再生過程中沒有明顯差異,提示Hsp90β更有可能參與肌肉再生調(diào)節(jié)過程。RNAseq分析以及隨后的qPCR驗證結(jié)果都揭示,特異性敲降Hsp90β后,成肌細胞中的p21轉(zhuǎn)錄水平升高。在這過程中,抑制Hsp90β后誘導(dǎo)p21上調(diào)依賴于p53。過表達Hsp90β和siRNA敲降實驗結(jié)果均表明,Hsp90β通過蛋白酶體途徑抑制p53的穩(wěn)定性。另外,成肌細胞中Hsp90β的表達降低導(dǎo)致細胞增殖減少,誘導(dǎo)p53調(diào)節(jié)的細胞衰老。之前報道的研究結(jié)果表明,在腫瘤中Hsp90與突變型p53存在相互作用,并對突變型p53有保護作用。然而,本研究發(fā)現(xiàn),在成肌細胞中Hsp90β特異性結(jié)合野生型p53。此外,Hsp90β通過與p53的主要E3泛素化連接酶... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖３．１．１?Ｈｓｐ９〇ｐ在肌肉再生過程中表達上調(diào)??（Ａ）８心（ＣＴＸ），

圖３．１．２敲降Ｈｓｐ９０ｐ特異性誘導(dǎo)成肌細胞ｐ２１上調(diào)。??（Ａ）對照或Ｈｓｐ９〇ＰｓｉＲＮＡ轉(zhuǎn)染后Ｃ２Ｃ１２成肌細胞的ＲＮＡ－ｓｅｑ分析熱圖。藍色??表示成肌細胞中敲降Ｈｓｐ９０ｐ后下調(diào)的基因，而紅色表示上調(diào)基因。以Ｌｏｇ２（ＦＰＫＭ??倍數(shù)變化）值顯示。（Ｂ）對照、Ｈｓｐ９０ａ或Ｈｓｐ９〇ｐ?ｓｉＲＮＡ轉(zhuǎn)染Ｃ２Ｃ１２成肌細胞??４８小時后ｑＰＣＲ分析ｐ２１表達。以Ａｃｔｉｎ作為內(nèi)參基因分析基因相對表達，獨立??實驗重復(fù)３次，（＊＊：?ｐ＜０．０１）。（Ｃ）對照、Ｈｓｐ９０ａ或Ｈｓｐ９〇ｐｓｉＲＮＡ轉(zhuǎn)染成肌??細胞后Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ檢測ｐ２］表達水平。ｔｕｂｕｌｉｎ作為內(nèi)參蛋白；（Ｄ?）對照或??Ｈｓｐ９〇ｐ?ｓｉＲＮＡ轉(zhuǎn)染成肌細胞后用ｐ２１抗體進行免疫染色。藍色為Ｈｏｅｃｈｓｔ染色，??紅色為Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ染色，分別標記細胞核和肌動蛋白絲。比例尺：２０）＿ｉｍ。??負責ｐ２１轉(zhuǎn)錄的主要轉(zhuǎn)錄因子有Ｐ５３、Ｆｏｘ０１／３、Ｓｍａｄ２／３／４［１７］。為研究Ｈｓｐ９０ｐ??通過何種通路調(diào)控ｐ２１轉(zhuǎn)錄水平，在抑制Ｈｓｐ９〇ｐ表達的同時，分別敲降ｐ５３、??Ｆｏｘ０１／３、Ｓｍａｄ２／３／４，抑制?ｐ５３、Ｆｏｘ０１／３、Ｓｍａｄ２／３／４?表達上升，然后此時檢測??

浙江大學博士學位論文?實驗結(jié)果??圖?３．１．３?Ｈｓｐ９０（３抑制?ｐ２１?需要?ｐ５３。??（Ａ）對照、Ｈｓｐ９〇ｐ?ｓｉＲＮＡ、Ｈｓｐ９０（３?ｓｉＲＮＡ?分別與?ｐ５３?或?ＦｏｘＯｌ／３?或?Ｓｍａｄ２／３／４??ｓｉＲＮＡ同時轉(zhuǎn)染成肌細胞４８ｈ，免疫熒光染色，綠色標記為ｐ２１，藍色為Ｈｏｅｃｈｓｔ??染色標記細胞核；（Ｂ）對照、Ｈｓｐ９０ｐ?ｓｉＲＮＡ、Ｈｓｐ９〇ｐ?ｓｉＲＮＡ與ｐ５３?ｓｉＲＮＡ同時??轉(zhuǎn)染成肌細胞４８ｈ，?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ分析，ｔｕｂｕｌｉｎ作為內(nèi)參蛋白。??根據(jù)以上結(jié)果我們提出假設(shè)，成肌細胞中Ｈｓｐ９０ｐ的下調(diào)可能導(dǎo)致ｐ５３的表達??增加。然而，之前有充分證據(jù)表明，在腫瘤中Ｈｓｐ９０的表達下調(diào)或活性抑制會加??速ｐ５３降解［１６］。通過Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ和免疫熒光染色的方法，檢測成肌細胞中Ｈｓｐ９〇ｐ??對ｐ５３的表達影響。與我們的假設(shè)一致，敲降Ｈｓｐ９０ｐ特異地顯著增加成肌細胞核??內(nèi)ｐ５３的表達，而Ｈｓｐ９０ａ對ｐ５３表達沒有明顯影響（圖３．１．４Ａ，?Ｂ）。??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Senescence-like changes induced by expression of p21Waf1/Cip1 in NIH3T3 cell line[J]. XI CHEN1, WEI ZHANG2, YUN FEI GAO1, XIAO QIN SU1, ZHONG HE ZHAI1,*1 College of Life Sciences, Peking University, Beijing 100871, China2 The Key Laboratory of Cell Proliferation and Regulation Biology of the Ministry of Education, College of Life Sciences,.  Cell Research. 2002(Z1)



本文編號：3492931