本文關鍵詞：高血壓病心房顫動患者血尿酸代謝異常及CYP11B2-344T＞C基因多態(tài)性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與目的:心房顫動(Atrial fibrillation)是臨床最常見的心律失常之一,據(jù)流行病學調(diào)查顯示,我國三十歲以上的人群,心房顫動的患病率為0.77%,且該患病率呈現(xiàn)隨年齡增長而逐漸增加的趨勢,其中男性患病率高于女性,但在女性絕經(jīng)期后,男女患病率沒有明顯差異。心房顫動常發(fā)生于某些器質(zhì)性心血管疾病,如高血壓病、冠心病、心肌病、心臟瓣膜病及心力衰竭等,其發(fā)病率增加和心力衰竭患者死亡率增加相關,最主要危害是卒中。然而,大多數(shù)心房顫動的發(fā)病原因不明。有研究證實14%的心房顫動由高血壓病導致,且高血壓病是新發(fā)心房顫動的獨立預測因素。臨床上可見某些心房顫動患者血尿酸(Uric acid)值偏高,除合并高血壓外無其他心血管病并存。尿酸是近年來新發(fā)現(xiàn)的一個與多種心血管疾病發(fā)病率及死亡率有關的危險因素,作為人體內(nèi)嘌呤核苷酸代謝的終產(chǎn)物,尿酸如何引起心房顫動發(fā)生,尚不清楚!我們推測高尿酸血癥可影響心房肌小動脈血管內(nèi)皮細胞功能,導致血管舒張能力下降,血管持續(xù)收縮,引起局部心肌發(fā)生缺血性改變及纖維化,進而導致心房結(jié)構改變及心房顫動發(fā)生。而動脈血管舒張功能和血管內(nèi)皮細胞合成的內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)關系密切,eNOS可催化L-精氨酸生成一氧化氮(NO),而NO有強大的血管舒張作用。當eNOS表達水平下降時,NO減少將會使血管舒張功能受到影響。此外,醛固酮合酶CYP11B2基因多態(tài)性將會影響腎功能,導致尿酸排泄障礙,從而引發(fā)高尿酸血癥。據(jù)此認為,高血壓病患者心房顫動的發(fā)生可能與血尿酸代謝異常及醛固酮合成酶CYP11B2-344TC基因多態(tài)性有關。為驗證上述假設,本研究將通過臨床病例回顧性分析、用不同濃度尿酸干預人類動脈血管內(nèi)皮細胞觀察其對于eNOS表達水平的影響及CYP11B2-344TC基因多態(tài)性對心房顫動易感性影響的薈萃分析,多角度探討高血壓病患者心房顫動發(fā)生的相關因素及可能機制。研究方法:一、病例資料回顧性分析研究1.選擇2010年1月至2014年12月在我院心內(nèi)科住院的高血壓病患者為研究對象,所有患者均符合中國高血壓防治指南制定的高血壓病診斷標準,心房顫動以經(jīng)體表12導聯(lián)心電圖或24小時動態(tài)心電圖診斷為標準。并以此分為高血壓病合并心房顫動組與高血壓病對照組。2.排除標準為:合并冠心病、繼發(fā)性高血壓、心臟瓣膜病、先心病、心肌病、心力衰竭、心臟手術后、糖尿病、家族性血脂異常、甲狀腺功能異常、血清肌酐大于110μmol/l、重度感染性疾病、自身免疫性疾病或炎癥性疾病、呼吸系統(tǒng)疾病及應用影響尿酸代謝藥物(利尿劑除外)的患者。3.查閱電子病歷數(shù)據(jù)庫,完整記錄所有入選患者的基本信息、臨床基本指標及相關輔助檢查結(jié)果,進行統(tǒng)計學分析。二、尿酸對人動脈血管內(nèi)皮細胞功能影響及機制研究1.應用不同濃度尿酸(400umol/l,600umol/l,800umol/l,1000umol/l)作用于人冠狀動脈血管內(nèi)皮細胞和人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞,應用real-time-pcr和westernblot檢測不同濃度尿酸作用下enosmrna和蛋白表達水平的變化,從而篩選出最適合的尿酸濃度。并以此尿酸濃度作用于兩種人血管內(nèi)皮細胞,應用real-time-pcr和westernblot方法在不同時間點檢測enosmrna和蛋白表達水平變化,從而選出變化最明顯的時間點進行實驗。2.用轉(zhuǎn)錄抑制劑放線菌素d預處理人血管內(nèi)皮細胞,再以尿酸進行干預,應用real-timepcr在不同時間點檢測enosmrna表達水平,以判斷尿酸對rna穩(wěn)定性的影響。3.用enos特異性抑制劑l-name預處理人血管內(nèi)皮細胞,再用尿酸進行干預,mtt方法檢測內(nèi)皮細胞增殖情況,以判斷尿酸對內(nèi)皮細胞增殖的影響是否直接與enos有關。4.用westernblot方法分別檢測不同時間點(10min,20min,30min,40min)經(jīng)尿酸作用的人血管內(nèi)皮細胞mapks(p38mapk,jnkmapk,erkmapk)通道是否有激活,判斷不同血管內(nèi)皮細胞是否被激活的mapks通道種類及激活時間不同。5.應用p38mapk通道特異性藥物抑制劑(sb203580)預處理人冠狀動脈血管內(nèi)皮細胞,然后加入尿酸,通過real-timepcr的方法檢測enosmrna表達水平變化,判斷尿酸對enosmrna表達水平的調(diào)節(jié)是否通過p38mapk通道激活實現(xiàn)的。應用腺病毒負性突變體p38-dn-adv轉(zhuǎn)染人冠狀動脈血管內(nèi)皮細胞后再加入尿酸,通過westernblot方法檢測enos蛋白表達水平的變化,判斷尿酸對enos蛋白表達水平的調(diào)節(jié)是否通過p38mapk通道激活實現(xiàn)的。6.pgl2-enos(-331/+109)-fireflyluciferasereporter質(zhì)粒和pgl2-β-actin-renillaluciferase共轉(zhuǎn)染hcaec細胞后,加入600umol/l尿酸繼續(xù)培養(yǎng),雙熒光報告基因系統(tǒng)檢測尿酸是否影響enos啟動子的活性,判斷尿酸是否在轉(zhuǎn)錄前水平調(diào)節(jié)enos基因表達。7.用染色質(zhì)免疫共沉淀技術檢測轉(zhuǎn)錄因子gata-4與enos啟動子的結(jié)合情況,以判斷尿酸是否對該結(jié)合狀況有影響。8.通過大鼠腹腔動脈血管環(huán)實驗檢測尿酸對動脈血管舒張功能的影響,并進行統(tǒng)計學分析。三、cyp11b2-344tc基因多態(tài)性與高血壓病心房顫動發(fā)生的相關性1.通過病例-對照研究進行meta分析,探討cyp11b2-344tc基因多態(tài)性和心房顫動易感性的關系。2.應用統(tǒng)計軟件計算等位基因模型,純合子模型,隱性模型和顯性模型的優(yōu)勢比(or)和95%可信區(qū)間(ci),并通過固定效應和隨機效應模型評估二者的關聯(lián)性。3.根據(jù)異質(zhì)性來源的不同進行亞組分析,最后達到應用單一原因?qū)τ诳傮w結(jié)果進行評價,并對文章的發(fā)表偏倚進行評估。研究結(jié)果:1.研究發(fā)現(xiàn)高血壓病患者血尿酸水平升高與心房顫動的發(fā)生密切相關(1)本研究共納入940例患者,其中高血壓病合并心房顫動患者362例,高血壓病不合并心房顫動患者578例(對照組)。兩組患者的性別、白細胞值、血鉀值、肌酐值、收縮壓、舒張壓、左心室后壁厚度及室間隔厚度與心房顫動發(fā)生的風險均無統(tǒng)計學差異(p0.05)。與對照組比較,高血壓病合并心房顫動組平均年齡更大(67.13±10.59vs.56.78±14.92,p0.01)、患高血壓病平均時間更長(9.27±9.50vs.3.85±3.57,p0.01),且血尿酸水平及左心房直徑明顯高于對照組,分別為388.11±112.51vs.311.54±122.51(p0.01)及45.79±7.56vs.34.08±4.36(p0.01)。(2)通過患者年齡、患高血壓病年限、血尿酸水平及左心房直徑對心房顫動發(fā)病風險預測進行l(wèi)ogistic回歸分析發(fā)現(xiàn),心房顫動發(fā)病風險和患者血尿酸值(or=1.014;95%可信區(qū)間=1.005-1.023,p=0.002)及左心房直徑(or=1.390;95%可信區(qū)間=1.221-1.582,p0.001)具有獨立的相關性。2.研究發(fā)現(xiàn)尿酸對人動脈血管內(nèi)皮細胞功能產(chǎn)生明顯影響(1)不同濃度尿酸作用于人冠狀動脈血管內(nèi)皮細胞和人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞后檢測結(jié)果顯示:尿酸濃度為600umol/l和1000umol/l時,24小時hcaec細胞enosmrna表達量分別降低39.22%和69.22%(p0.01);蛋白表達量分別降低62.10%和65.67%(p0.05)。在huvec細胞中,當尿酸濃度為600umol/l和1000umol/l時,24小時enosmrna表達水平分別下降27.44%和51.87%(p0.01);蛋白表達水平分別下降7.21%(p0.05)和52.88%(p0.01);當尿酸作用達48小時,600umol/l濃度組enos蛋白表達量下降40.31%(p0.01)。(2)用轉(zhuǎn)錄抑制劑放線菌素d1ug/ul預處理人血管內(nèi)皮細胞,再用600umol/l尿酸干預hcaec細胞和huvec細胞,與無放線菌素d的尿酸組比較,兩種細胞enosmrna降解趨勢無顯著性差別。(3)用enos特異性抑制劑l-name100um預處理人血管內(nèi)皮細胞,再應用600umol/l尿酸干預,與無l-name的尿酸組比較,hcaec和huvec細胞增殖趨勢無明顯差異。(4)600umol/l尿酸作用于hcaec細胞時,p38mapk通道和erkmapk通道分別被激活,相同濃度尿酸作用于huvec細胞時,被激活的通道是jnkmapk和erkmapk通道。(5)用p38mapk通道特異性藥物抑制劑(sb203580)預處理hcaec細胞后,加入600umol/l尿酸,與對照組比較enosmrna表達水平幾乎無變化,表明尿酸降低enosmrna表達的作用被逆轉(zhuǎn)。(6)腺病毒負性突變體p38-dn-adv轉(zhuǎn)染hcaec細胞,再加入600umol/l尿酸,與對照組比較enos蛋白表達水平幾乎無變化,表明尿酸降低enos蛋白表達的作用被逆轉(zhuǎn)。(7)pgl2-enos(-331/+109)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染hcaec細胞后,加入600umol/l尿酸繼續(xù)培養(yǎng)24小時后,檢測細胞enos啟動子活性較無尿酸對照組下降43.58%(p0.01)。(8)染色質(zhì)免疫共沉淀技術檢測與對照組相比,尿酸使轉(zhuǎn)錄因子gata-4與hcaec細胞啟動子的結(jié)合力增強。(9)在內(nèi)皮依賴型緩激肽作用下,對照組大鼠離體腹腔主動脈血管環(huán)發(fā)生舒張。作為陰性對照組的l-name組動脈血管環(huán)舒張幅度明顯減弱,和對照組相比,尿酸組動脈血管環(huán)的舒張幅度減弱48.53%(p0.01)。3.通過9項病例對照研究證實,在高血壓病人群中,cyp11b2-344tc多態(tài)性明顯與心房顫動易感性顯著相關(等位基因模型:or=1.18,95%ci=1.04-1.33,p0.01;純合子模型:or=1.54,95%ci=1.17-2.03,p0.01;隱性模型:or=1.70,95%CI=1.24-2.32,p0.01)。結(jié)論:1.初步闡明了尿酸代謝異常促發(fā)高血壓病患者心房顫動發(fā)生的作用及可能機制。即尿酸通過下調(diào)HCAEC細胞eNOS mRNA和蛋白表達水平,影響動脈血管舒張功能,使血管持續(xù)收縮,進而導致局部心房肌發(fā)生缺血性變化及纖維化,成為心房顫發(fā)生的因素。2.從臨床和基礎研究兩個方面均證實了血尿酸水平與心房顫動發(fā)生密切相關,這種相關性在高血壓病合并心房顫動患者中表現(xiàn)尤為明顯。3.通過Meta分析從基因多態(tài)性的角度分析高血壓病心房顫動的病因,證實在高血壓病人群中,CYP11B2-344TC基因多態(tài)性與心房顫動易感性存在顯著的相關性。豐富了對心房顫動發(fā)病因素的認識,4.通過心房顫動病因方面的認識,可以從控制體內(nèi)尿酸值的角度預防高血壓病患者心房顫動的發(fā)生,為臨床防治高血壓病心房顫動的發(fā)生提供了新的思路。
【關鍵詞】：心房顫動 尿酸 ENOS C%E5%9F%BA%E5%9B%A0" target="_blank">CYP11B2-344T>C基因 高血壓病
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R541.75
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-13
• 中文摘要13-18
• 第一章 前言18-21
• 第二章 高血壓病患者血尿酸水平與心房顫動發(fā)生的相關性21-28
• 2.1 方法21-23
• 2.2 結(jié)果23-25
• 2.3 討論25-27
• 2.4 小結(jié)27-28
• 第三章 尿酸對人類動脈血管內(nèi)皮細胞功能的影響及機制28-66
• 3.1 材料與方法28-50
• 3.2 結(jié)果50-60
• 3.3 討論60-65
• 3.4 小結(jié)65-66
• 第四章 CYP11B2- 344T＞C基因多態(tài)性與高血壓病心房顫動發(fā)生相關性66-75
• 4.1 方法66-68
• 4.2 結(jié)果68-73
• 4.3 討論73-74
• 4.4 小結(jié)74-75
• 全文總結(jié)75-76
• 參考文獻76-85
• 文獻綜述 血尿酸與心血管疾病的相關性研究進展85-100
• 參考文獻93-100
• 攻讀學位期間發(fā)表的論文100-101
• 致謝101

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