【摘要】：背景:動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是心腦血管疾病的的主要誘因,血管內(nèi)皮功能障礙是AS的起始步驟。氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)可引起血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變。本課題在前期實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)上以丹參有效活性成分丹參素鈉(DSS)來(lái)探討其減輕血管內(nèi)皮損傷信號(hào)通路,進(jìn)一步擴(kuò)展其對(duì)中藥復(fù)方定心方在抗AS治療的藥理機(jī)制研究,為中醫(yī)藥防治AS尋找新的靶點(diǎn)。目的:從動(dòng)物和細(xì)胞水平探討DSS對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及可能機(jī)制。方法:(1)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)SPF級(jí)8周齡雄性ApoE基因敲除(Apo E-/-)小鼠50只,以人血清低密度脂蛋白(LDL)誘導(dǎo)血管內(nèi)皮損傷的方法建立APoE-/-小鼠AS血管損傷模型。隨機(jī)分為5組,每組10只,分別為:①對(duì)照組、②模型組、③DSS-L、④DSS-M、⑤DSS-H,②、③、④、⑤組均給予DSS2.5、5、7.5mg/kg腹腔注射,每日一次;①組灌服等劑量生理鹽水,實(shí)驗(yàn)16周。(2)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)采用ox-LDL誘導(dǎo)HUVEC損傷的方法建立細(xì)胞模型。濃度梯度組:分別以 0、25、50、100mg/L 的 ox-LDL 作用 HUVEC24h。時(shí)間梯度組:以 50mg/L ox-LDL 作用 HUVEC0,3,6,12,24 h。干預(yù)組:①對(duì)照組②DSS 組③ox-LDL+DSS組④ ox-LDL 組⑤ ox-LDL+SB203580⑥ ox-LDL+SP600125。結(jié)果:(1)小鼠血脂檢測(cè)結(jié)果顯示:模型組顯著高于對(duì)照組(P0.05),與模型組相比,DSS-M 與 DSS-H 血清 TC、TG、LDL-C 顯著降低(P0.05)。(2)小鼠主動(dòng)脈AS斑塊病理形態(tài)學(xué)觀察:模型組較對(duì)照組有較明顯的AS斑塊形成,DSS可劑量依賴性抑制AS斑塊形成(P0.05)。(3)小鼠主動(dòng)脈AS斑塊LDL的表達(dá):各給藥組LDL表達(dá)較模型組均顯著降低(P0.05);DSS-H組顯著低于DSS-L、DSS-M組(P0.05)。(4)小鼠主動(dòng)脈LDL蛋白表達(dá):與模型組相比,DSS-M、DSS-H組顯著抑制LDL蛋白表達(dá)(P0.05)。(5)小鼠血清ET-1檢測(cè)結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,模型組小鼠的血漿ET-1含量水平顯著增高(P0.05),DSS-M組顯著低于模型組(P0.05)。(6)ox-LDL對(duì)HUVEC增殖的影響:濃度梯度組:與模型組相比,25、50、100 mg/L ox-LDL組均可顯著抑制HUVEC增殖(P0.05),25、50、100 mg/L ox-LDL組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。時(shí)間梯度組:與對(duì)照組相比,50 mg/L ox-LDL作用12 h、24 h后均能抑制HUVEC增殖(P0.05)。(7)ox-LDL對(duì)HUVEC凋亡的影響:濃度梯度組:與模型組相比,50、100mg/Lox-LDL作用24h后可顯著提高早、晚期凋亡率%(P=0.00),兩組間無(wú)顯著差異(P0.05)。時(shí)間梯度組:50 mg/L ox-LDL作用12、24h后均可提高早、晚期凋亡率%(P=0.001)。(8)ox-LDL對(duì)HUVEC中p-p38 MAPK蛋白表達(dá)影響:濃度梯度組:100 mg/L ox-LDL作用24 h后達(dá)到峰值(P=0.00)。時(shí)間梯度組:50 mg/L ox-LDL作用3h、6h后均可提高HUVEC中p-p38 MAPK蛋白表達(dá)(P0.05)。(9)ox-LDL對(duì)HUVEC中的p-JNK蛋白表達(dá)影響:濃度梯度組:25、50mg/L ox-LDL作用12 h后可顯著提高HUVEC中p-JNK蛋白的表達(dá)(P=0.00)。時(shí)間梯度組:50mg/Lox-LDL作用3、6h后均可提高HUVEC中的p-JNK蛋白表達(dá)(P0.05),兩組間無(wú)顯著差異(P0.05)。(10)DSS對(duì)ox-LDL影響HUVEC細(xì)胞內(nèi)p-p38 MAPK、p-JNK蛋白表達(dá)影響:與模型組相比,DSS-M和DSS-H組能夠顯著抑制HUVEC中p-p38 MAPK、p-JNK蛋白表達(dá)(P=0.00),兩組間無(wú)顯著差異(P0.05)。(11)DSS對(duì)ox-LDL影響HUVEC分泌TNF-α、IL-6的干預(yù)作用:與模型組相比,25、200mg/L DSS預(yù)處理HUVEC 24h后降低HUVEC分泌IL-6水平(P0.05),兩組間無(wú)顯著差異(P0.05);50、200mg/LDSS預(yù)處理HUVEC24h后降低HUVEC分泌TNF-α水平(P0.05),兩組間無(wú)顯著差異(P0.05)。(12)DSS及MAPKs通路抑制劑對(duì)ox-LDL影響HUVEC增殖的干預(yù)作用:與模型組相比,100 mg/L DSS組可減輕ox-LDL對(duì)HUVEC增殖的抑制作用(P=0.00),SP600125及 SB203580均可減輕 ox-LDL 對(duì) HUVEC 增殖的抑制(P0.05)。(13)DSS及MAPKs通路抑制劑對(duì)ox-LDL影響HUVEC凋亡的干預(yù)作用:與模型組相比,50、100mg/L DSS均可顯著降低早、晚期凋亡率%(P=0.00),兩組間無(wú)顯著差異(P0.05),SP600125及SB203580均可降低早、晚期凋亡率%(P=0.001)。結(jié)論:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)DSS可通過(guò)降血脂、ET-1,減少IL-6、TNF-α,抑制AS斑塊形成和下調(diào)LDL表達(dá)等方面延緩AS的發(fā)生發(fā)展。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)ox-LDL可抑制HUVEC增殖并促進(jìn)其凋亡、可誘導(dǎo)HUVEC分泌炎癥因子,DSS可通過(guò)增加HUVEC增殖,減少HUVEC凋亡及炎癥因子分泌來(lái)發(fā)揮抗AS作用,其機(jī)制可能與抑制MAPKs信號(hào)通路有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2361123