本文關(guān)鍵詞：miR-17在乳腺癌中表達的臨床意義及其促進乳腺癌細胞增殖的實驗研究　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景乳腺癌是我國女性最常見的惡性腫瘤之一。乳腺癌的發(fā)生伴隨著基因、表觀遺傳以及各種各樣分子機制的變化。隨著乳腺癌的早期診斷的進步,以及放射治療、各種輔助治療的發(fā)展,乳腺癌的預(yù)后已經(jīng)有了很大的提高,但是乳腺癌仍然是威脅廣大女性生命的最常見惡性腫瘤�；颊叩哪挲g、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、組織病理學(xué)類型、病理學(xué)分級、激素受體狀態(tài)常常被用來評估患者的預(yù)后以指導(dǎo)臨床決策。然而,由于乳腺癌基因背景以及對治療反應(yīng)的多樣性,這些評價乳腺癌的指標(biāo)還遠遠不夠,我們需要更多更好的生物標(biāo)記物來指導(dǎo)早期診斷,選擇合適的治療手段以及精準(zhǔn)的預(yù)測預(yù)后。MicroRNAs(miRNAs)是包含約20-25個核苷酸的小分子非編碼RNA,它通過對目標(biāo)mRNA降解和翻譯抑制起著轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的作用。大量研究表明,miRNAs的異常表達和包括腫瘤在內(nèi)的許多疾病息息相關(guān)。一些miRNA可以作為抑癌基因或促癌基因在乳腺癌的形成過程中起著極為重要的作用,它們可以調(diào)控細胞增殖、分化、腫瘤轉(zhuǎn)移以及腫瘤血管形成�，F(xiàn)今用它作為腫瘤診斷、預(yù)后、預(yù)測治療反應(yīng)的生物標(biāo)記物已經(jīng)越來越得到學(xué)者們的一致認同。近年來,研究表明miR-17在多種腫瘤的形成中的發(fā)揮著重要作用。而關(guān)于miR-17在乳腺癌中的表達模式及臨床意義方面尚未有最新報道。目的本實驗我們主要研究miR-17表達水平和乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系,探討miR-17表達水平對乳腺癌總生存率(OS)的影響。同時通過實驗明確miR-17的表達情況對乳腺癌細胞系的影響,為miR-17可能作為乳腺癌診斷、預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)奠定基礎(chǔ)。方法我們收集了 2008年1月至2009年12月期間在南京醫(yī)科大學(xué)附屬常州市第二人民醫(yī)院住院手術(shù)的乳腺癌患者標(biāo)本132例。通過qRT-PCR檢測miR-17在乳腺癌組織與癌旁組織中的表達情況。比較乳腺癌組織和癌旁正常組織miR-17表達的差異,并且觀察了不同病理分期的乳腺癌表達miR-17的差異。同時我們通過miR-17表達水平高低的不同,將患者分成miR-17高表達組和miR-17低表達組,分析兩組病人ER、PR、HER-2、CD44、COX-2、EGFR、PGP狀態(tài)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的差異。對于臨床資料,我們還通過Kaplan-Meier法和log-rank檢驗來計算分析了 miR-17高表達組和miR-17低表達組從手術(shù)確定乳腺癌開始到隨訪期結(jié)束的總生存期的差異。我們假設(shè)miR-17在乳腺癌中扮演著癌基因的角色,為了驗證這個假設(shè),我們檢測了 miR-17在乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-435S、MDA-MB-231和正常乳腺細胞系MCF10A中表達差異。在乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-231中轉(zhuǎn)染miR-17 mimics或miR-17 inhibitor,通過MTT的方法觀察其對乳腺癌細胞增殖的影響。另外,我們還通過流式細胞檢測技術(shù)檢測了 miR-17對細胞周期的影響。最后通過裸鼠移植瘤實驗,驗證miR-17的體內(nèi)成瘤能力。將20只小鼠隨機分成兩組,建立穩(wěn)定的移植瘤模型,每7天測量腫瘤體積,42天后處死小鼠,評估腫瘤。結(jié)果乳腺癌組織和癌旁正常組織相比,miR-17的表達顯著增高(p0.0001,n=40)。另外,病理分期越高,miR-17 的表達越高(Stage1 and Stage 2,p =0.5612;Stage 1 and Stage 3,p0.05;Stage 1 and Stage 4,p0.05)。數(shù)據(jù)顯示,miR-17 高表達組和低表達組ER表達水平和Her-2表達水平有差異(p0.05)。年齡、PR、CD44、COX-2、EGFR、PGP狀態(tài)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況未見明顯差異。miR-17低表達組和高表達組相比總生存期較長,兩者有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05,n=36)。體外實驗發(fā)現(xiàn),與正常乳腺細胞系MCF10A相比,miR-17在乳腺癌細胞系MCF-7、MDA-MB-435S、MDA-MB-231 中表達水平更高。miR-17 mimics 促進乳腺癌細胞增殖,而miR-17 inhibitor抑制乳腺癌細胞增殖。同時發(fā)現(xiàn)miR17 inhibitor將乳腺癌細胞阻滯在細胞周期S期。通過移植瘤實驗,我們發(fā)現(xiàn),agomiR-17組小鼠的腫瘤更大,表明miR-17可以在體內(nèi)誘導(dǎo)腫瘤增長。結(jié)論本研究表明,miR-17在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中表達上調(diào),miR-17上調(diào)可以促進乳腺癌細胞增殖。在乳腺癌患者中miR-17高表達,總生存率較低。提示miR-17可能可以成為乳腺癌診斷和治療的新的生物標(biāo)記物。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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本文編號：1319475