本文關鍵詞：星形膠質細胞NDRG2在七氟烷預處理神經保護作用中的機制研究

  更多相關文章： 七氟烷 預處理 神經保護 NDRG2

【摘要】：目的:大量在體研究和離體研究均表明,常用吸入性麻醉藥七氟烷預處理可誘導腦缺血耐受,減輕腦缺血再灌注損傷,但其機制尚未完全明了。N-myc下游調節(jié)基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)是一個在中樞神經系統(tǒng)內主要表達于星形膠質細胞的基因,與細胞增殖、分化、應激等功能密切相關。我們前期工作發(fā)現,局灶性腦缺血再灌注損傷后缺血半暗帶區(qū)NDRG2發(fā)生了時間和空間上的表達變化,且參與了缺血再灌注損傷后p53介導的細胞凋亡過程。本研究旨在從在體和離體兩方面探討NDRG2及其介導的細胞凋亡和星形膠質細胞功能改變在七氟烷預處理神經保護效應中的作用及機制。方法:在體—健康雄性成年SD大鼠,2%七氟烷預處理1h,預處理結束2h后行大腦中動脈阻閉(middle cerebral artery occlusion,MCAO)誘導局灶性腦缺血,缺血120min后抽出線栓恢復灌注。再灌注24 h依據Garcia評分標準評估神經功能,并行TTC(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,2,3,5-氯化三苯基四氮唑)染色計算腦梗死容積百分比,采用Western Blot、real-time PCR、免疫熒光染色、TUNEL(transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end labeling,轉移酶介導的三磷酸脫氧鳥苷-生物素末端標記)染色等測定缺血半暗帶區(qū)NDRG2表達、分布和細胞凋亡情況。離體—取新生SD鼠的大腦皮層培養(yǎng)原代星形膠質細胞,采用脂質體轉染法向細胞內轉染NDRG2 si RNA或NDRG2過表達質粒,轉染24h給予2%七氟烷預處理1h,預處理結束2h后進行氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)4h,復氧24h檢測細胞活力(MTT試驗)、細胞毒性(LDH釋放率)、凋亡情況(TUNEL染色、活化Caspase-3表達)以及NDRG2表達變化。結果:七氟烷預處理顯著降低了局灶性腦缺血再灌注引起的大鼠神經功能損傷和腦梗死容積,減少了缺血半暗帶組織TUNEL染色陽性細胞數目和活化Caspase-3表達量,抑制了缺血后NDRG2上調和核轉移現象(P0.05)。原代培養(yǎng)星形膠質細胞OGD模型中得到了類似的結果。采用NDRG si RNA降低原代培養(yǎng)星形膠質細胞中NDRG2表達可增加細胞活力,減輕氧糖剝奪引起的LDH(lactate dehydrogenase,乳酸脫氫酶)釋放,降低TUNEL陽性細胞數和活化Caspase-3表達(P0.05);而轉染NDRG2過表達質粒使原代培養(yǎng)星形膠質細胞中NDRG2上調則可部分逆轉七氟烷預處理減輕氧糖剝奪損傷的作用(P0.05)。結論:七氟烷預處理可通過抑制腦組織星形膠質細胞內NDRG2的表達和活性,減輕細胞凋亡,改善星形膠質細胞功能,從而減輕腦缺血再灌注損傷。本研究為七氟烷預處理可能的臨床應用提供了可靠的理論支持,也為開發(fā)新的腦缺血損傷防治措施提供了新的靶點。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R614
，

本文編號：1267453