目的:上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)與腫瘤的發(fā)生及一系列惡性進(jìn)展密切相關(guān),micro RNA(mi RNA)可通過調(diào)節(jié)相關(guān)基因調(diào)控EMT。本研究主要觀察mi R-205-5p對(duì)耐順鉑鼻咽癌細(xì)胞EMT的調(diào)控作用,并明確其作用機(jī)制,以期為開辟新的鼻咽癌臨床治療途徑提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.mi RNA芯片技術(shù)檢測(cè)耐順鉑鼻咽癌HNE1/DDP細(xì)胞和敏感株細(xì)胞HNE1中mi RNAs表達(dá)的變化,篩選出表達(dá)差異顯著的mi RNAs,并通過實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(q RT-PCR)進(jìn)行驗(yàn)證;2.用Lipofectamine 2000將mi R-205-5p mimic或mi R-205-5p inhibitor轉(zhuǎn)染HNE1細(xì)胞或HNE1/DDP細(xì)胞,以改變細(xì)胞內(nèi)mi R-205-5p的表達(dá)水平;3.MTT法檢測(cè)鼻咽癌細(xì)胞增殖及存活情況;集落克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞集落形成能力;Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;4.劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞水平運(yùn)動(dòng)能力;Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的體外遷移及侵襲能力;5.倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生物學(xué)形態(tài)的變化;Western blot及q RT-PCR檢...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
材料與方法
    1.材料與儀器
        1.1 細(xì)胞系
        1.2 試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)與凍存
        2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3 MTT實(shí)驗(yàn)
        2.4 Annexin V/PI雙染實(shí)驗(yàn)
        2.5 集落克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.6 侵襲與遷移實(shí)驗(yàn)
        2.7 免疫印跡(Western blot)實(shí)驗(yàn)
        2.8 q RT-PCR
        2.9 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
    3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    1.HNE1/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑具有耐藥性
    2.HNE1/DDP細(xì)胞中miR-205-5p高表達(dá)
    3.調(diào)控鼻咽癌細(xì)胞中miR-205-5p的表達(dá)
    4.miR-205-5p促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞增殖
    5.miR-205-5p抑制劑增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性
    6.miR-205-5p促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞侵襲遷移
    7.miR-205-5p促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞EMT進(jìn)程
    8.PTEN是 miR-205-5p的下游靶基因
    9.PI3K/AKT信號(hào)通路參與miR-205-5p的調(diào)控作用
    10.敲低PTEN可促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞增殖
    11.敲低PTEN拮抗miR-205-5p抑制劑的作用
    12.miR-205-5p通過PI3K/AKT信號(hào)通路調(diào)控EMT
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄 A 中英文術(shù)語縮略詞表
附錄 B 常用試劑配制方法
附錄 C 個(gè)人簡(jiǎn)歷
附錄 D miR-205-5p在腫瘤中的研究進(jìn)展綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3785922