鐵硫（Fe-S）蛋白在鐵-氧傳感器,酶和基因表達調(diào)控中起著至關重要的作用。NEET蛋白屬于獨特的鐵硫（Fe-S）蛋白家族,可調(diào)節(jié)鐵和活性氧的體內(nèi)穩(wěn)態(tài),并參與癌癥、糖尿病、神經(jīng)變性和衰老的進程。在人類線粒體中,NEET蛋白包括:mitoNEET（mNT）,營養(yǎng)剝奪自噬1（NAF-1）和線粒體內(nèi)NEET蛋白（Miner2）。mNT是結合抗2型糖尿病吡格列酮藥物的蛋白,NAF-1蛋白的表達抑制會導致壽命縮短,NAF-1和mNT的骨架折疊與植物的同型二聚體NEET蛋白（At-NEET）相似。盡管發(fā)現(xiàn)Miner2蛋白在肺癌,乳腺癌和其他類型的癌癥中高表達,但Miner2蛋白在線粒體中的功能了解甚少,所以本文研究Miner2蛋白的相關性質(zhì)。首先,Miner2蛋白表達與純化。利用分子生物學方法,將重組質(zhì)粒pET22b-Miner2（Δ35）轉入大腸桿菌（E.coli）BL21中,經(jīng)IPTG（0.3 mM）誘導獲得了該蛋白的可融性表達,經(jīng)Ni-NTA親和層析、CM陽離子交換層析多步純化后,得到了比較純的目標蛋白。為該蛋白的化學性質(zhì)研究準備了必要的材料。其次,Miner2蛋白[2Fe-2S]簇穩(wěn)定性研究... 

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
ABSTRACT
第一章 綜述
    1.1 鐵硫蛋白
        1.1.1 鐵硫蛋白的概述
        1.1.2 鐵硫蛋白的重要性
    1.2 [2Fe-2S]蛋白
        1.2.1 NEET蛋白的定位與分類
        1.2.2 NEET蛋白獨特的結構
    1.3 NEET蛋白家族
        1.3.1 NEET蛋白簡介
        1.3.2 NEET蛋白的結構
        1.3.3 NEET蛋白[2Fe-2S]簇結合域
        1.3.4 NEET蛋白的功能
    1.4 本課題研究意義
第二章 Miner2蛋白的表達與純化
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要儀器
        2.2.3 溶液的配置
    2.3 實驗方法
        2.3.1 Miner2 蛋白的表達
        2.3.2 Miner2 蛋白的純化
    2.4 結果與討論
        2.4.1 Miner2 蛋白的表達
        2.4.2 Miner2 蛋白的純化
        2.4.3 Miner2 蛋白的表征
    2.5 結論
第三章 Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇穩(wěn)定性研究
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 主要試劑
        3.2.2 主要儀器
    3.3 方法
        3.3.1 紫外-吸收光譜測定
        3.3.2 熒光光譜測定
    3.4 結果與討論
        3.4.1 pH對 Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇穩(wěn)定性的影響
        3.4.2 不同離子強度下Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇動力學研究
        3.4.3 溫度對Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇動力學研究
        3.4.4 Miner2 蛋白[2Fe-2S]簇在溶液中的存在形式
    3.5 結論
第四章 Miner2 蛋白氧化還原性研究
    4.1 引言
    4.2 材料
        4.2.1 主要試劑
        4.2.2 主要儀器
    4.3 方法
        4.3.1 紫外-吸收光譜測定
        4.3.2 電化學方法測定
    4.4 結果與討論
        4.4.1 紫外-吸收光譜研究Miner2 蛋白的氧化還原性
        4.4.2 Miner2 蛋白的循環(huán)伏安研究
    4.5 結論
第五章 [2Fe-2S]簇對Miner2 蛋白構象的影響
    5.1 引言
    5.2 材料
        5.2.1 主要試劑
        5.2.2 主要儀器
    5.3 方法
        5.3.1 熒光光譜測定
        5.3.2 紫外光譜測定
        5.3.3 遠紫外圓二色光譜(CD)測定
    5.4 結果與分析
        5.4.1 [2Fe-2S]簇對Miner2 蛋白構象的影響
        5.4.2 Miner2 蛋白與TNS作用的光譜
        5.4.3 TNS和 Miner2 蛋白Trp60 的能量轉移
    5.5 結論
第六章 總結與展望
    6.1 結論
    6.2 展望
參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡況及聯(lián)系方式


【參考文獻】：
碩士論文
[1]人中心蛋白3與金屬離子結合的性質(zhì)研究[D]. 楚雪峰.山西大學 2016



本文編號：3654379