本文關鍵詞：2,5-己二酮誘導大鼠骨髓間充質干細胞凋亡的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察2,5-己二酮(HD)對大鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)的凋亡作用,探討相關機制。方法:從大鼠的骨髓中分離提取BMSCs,進行體外培養(yǎng),觀察其形態(tài)學特征。流式細胞儀檢測其特異標記物CD29、CD90和CD45的表達。經(jīng)成骨誘導,茜素紅染色后觀察并拍照;經(jīng)成脂誘導,油紅O染色后觀察并拍照。經(jīng)成神經(jīng)細胞培養(yǎng)液誘導,免疫組化法檢測NSE的表達。以確認其為BMSCs。將第五代BMSCs暴露于0 m M、10 m M、20 m M和40 m M HD中,培養(yǎng)24 h。用噻二苯基四氮唑溴鹽(MTT)法觀察細胞存活率;進行HE染色,并觀察細胞的形態(tài)學變化;運用Hoechst 33342染色法和TUNEL-Hoechst雙染色法檢測細胞凋亡;采用Real Time RT-PCR法檢測Bax和Bcl-2基因水平的變化;應用Western-Blotting法檢測Bax、Bcl-2蛋白水平的變化;應用JC-1試劑盒檢測線粒體跨膜電位的變化;應用Western-Blotting法分別檢測線粒體和胞漿中細胞色素C蛋白水平的變化;采用分光光度法檢測Caspase-3的活力。用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對試驗結果進行統(tǒng)計分析。結果:1.BMSCs的鑒定BMSCs呈紡錘形,形態(tài)大致均勻。流式細胞儀檢測其表面標志物CD29、CD90和CD45的表達分別為90.10%、96.61%和0.40%。茜素紅染色顯示,BMSCs能夠分化為成骨細胞;油紅O染色顯示,BMSCs能夠分化為脂肪細胞。誘導24 h、48 h和72 h后NSE的表達分別為29.26%、33.95%和51.86%,而對照組為陰性的標志物,提示BMSCs能夠分化為神經(jīng)細胞。確認所培養(yǎng)的細胞確為BMSCs。2.MTT測定細胞活力HD染毒組BMSCs存活率與對照組相比,顯著降低(p0.05),并呈現(xiàn)劑量反應關系。3.凋亡細胞形態(tài)HE染色結果顯示,染毒BMSCs細胞體變小,突起變短或者消失,且細胞核固縮。Hoechst染色結果表明,染毒BMSCs可見細胞核固縮,甚至出現(xiàn)新月形核等凋亡變化特征。4.細胞凋亡率TUNEL-Hoechst雙染色結果顯示,10 m M、20m M和40 m M HD染毒組的凋亡指數(shù)分別為3.00%、4.12%和18.63%,與對照組相比顯著增高(p0.05),并呈現(xiàn)劑量反應關系。5.基因及蛋白表達水平Real Time RT-PCR結果表明,染毒組Bax基因表達水平顯著高于對照組(p0.05),并呈現(xiàn)劑量反應關系;而Bcl-2基因表達水平則顯著降低(p0.05)。Western Blot檢測結果顯示,HD染毒組BMSCs的Bax蛋白表達水平顯著高于對照組(p0.05),Bcl-2蛋白表達水平則顯著下降(p0.05),Bax蛋白與Bcl-2蛋白的表達比率顯著高于對照組(p0.05),并呈現(xiàn)劑量依賴性增高。HD染毒組BMSCs胞漿中的細胞色素C蛋白表達水平顯著高于對照組(p0.05),線粒體中的細胞色素C蛋白表達水平顯著下降(p0.05)。6.MMP變化JC-1染色結果顯示,HD染毒組的紅綠熒光相對比例均顯著低于對照組(p0.05),提示,與對照組相比,HD染毒組BMSCs的線粒體跨膜電位顯著下降(p0.05)。7.Caspase-3活力與對照組相比,染毒組BMSCs的Caspase-3活力顯著升高(p0.05)。結論:HD誘導BMSCs凋亡;HD激活線粒體依賴的caspase-3信號通路;HD誘導BMSCs凋亡可能與線粒體依賴的caspase-3途徑激活有關。
【關鍵詞】：25-己二酮 骨髓間充質干細胞 凋亡 線粒體膜電位 caspase-3活性
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 材料和方法14-25
• 1. 試劑14-15
• 2. 儀器15
• 3. 實驗動物15
• 4. BMSCs的培養(yǎng)15-16
• 5. BMSCs的鑒定16-17
• 6. 實驗分組17
• 7. MTT法分析細胞活力17
• 8. HE染色觀察細胞形態(tài)17
• 9. Hoechst 33342染色觀察細胞凋亡形態(tài)17-18
• 10. TUNEL-Hoechst雙染色檢測細胞凋亡指數(shù)18
• 11. Real time RT-PCR檢測基因表達18-21
• 12. Western-Blotting檢測蛋白的表達21-23
• 13. JC-1 檢測MMP變化23-24
• 14. 分光光度法檢測Caspase-3 活性24
• 15. 統(tǒng)計分析24-25
• 結果25-34
• 1. BMSCs形態(tài)及鑒定結果25-26
• 2. HD染毒對細胞活力的影響26-27
• 3. HD染毒對細胞凋亡形態(tài)的影響27-28
• 4. HD對BMSCs凋亡率的影響28-30
• 5. HD對中的Bax和Bcl-2 表達的影響30-32
• 6. HD對BMSCs線粒體膜電位的影響32
• 7. HD對BMSCs細胞色素C蛋白表達的影響32-34
• 8. HD對BMSCs中caspase-3 活力的影響34
• 討論34-38
• 結論38-39
• 參考文獻39-44
• 綜述44-51
• 參考文獻48-51
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況51-52
• 致謝52-53

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1 韓曉英;安麗紅;鄒朝雙;朱明星;謝克勤;;活細胞成像技術研究2,5-己二酮對中分子量神經(jīng)絲運輸?shù)挠绊慬J];毒理學雜志;2013年03期

2 葉能權,陳利平,童映;氣相色譜法測定尿中的2,5-己二酮[J];中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志;1999年01期

3 王麗萍;;不接觸正己烷的人尿中2,5-已二酮的測定[J];化工勞動保護(工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病分冊);1988年02期

4 黃盈煜;謝維平;傅暉蓉;胡桂蓮;;尿中2,5-己二酮的氣質聯(lián)用測定法[J];中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志;2006年05期

5 張?zhí)炝?趙秀蘭,謝克勤,朱振平;2,5-己二酮對大鼠神經(jīng)組織微管含量的影響[J];中國藥理學與毒理學雜志;2004年05期

6 孫凌聰,楊國成,夏臘菊,朱漢明,張澄宇,劉少平;2,5-己二酮誘導的PC12細胞損傷和凋亡[J];中國職業(yè)醫(yī)學;2005年03期

7 賀耀武;孫萬賦;曹玲華;周樹寶;阿吉艾克拜爾·艾薩;;己二酮糖硝基甲烷加合產物的結構確定[J];波譜學雜志;2011年02期

8 余新天;楊建平;朱志良;張素麗;邱星元;邊寰鋒;黃海燕;;2,5-己二酮對SK-N-SH細胞中神經(jīng)生長因子表達水平的研究[J];實用預防醫(yī)學;2014年06期

9 張?zhí)炝?朱振平,崔寧,趙秀蘭,謝克勤;2,5-己二酮對大鼠感覺神經(jīng)功能的影響[J];衛(wèi)生毒理學雜志;2005年01期

10 張立軍;齊敏;戎江瑞;;尿中2,5-己二酮氣相色譜測定方法探討[J];職業(yè)衛(wèi)生與應急救援;2006年02期

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1 陳若霖;2,5-己二酮誘導大鼠骨髓間充質干細胞凋亡的研究[D];大連醫(yī)科大學;2015年

2 王龍娟;2,5-己二酮對成年大鼠海馬神經(jīng)元及其再生的影響[D];大連醫(yī)科大學;2015年

3 房升;呋喃酮關鍵中間體—3，，4-二羥基-2，5-己二酮的合成研究[D];浙江大學;2006年

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