發(fā)布時(shí)間：2021-11-04 04:32

　　背景:中樞敏化是慢性偏頭痛（chronic migraine,CM）的潛在發(fā)病機(jī)制,并且與持續(xù)的神經(jīng)元過度興奮有關(guān)。興奮性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體2（excitatory amino acid transporter 2,EAAT2）的功能障礙將突觸間隙內(nèi)谷氨酸的大量積累,使谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）受體過度激活,從而導(dǎo)致突觸可塑性的增強(qiáng)而誘發(fā)中樞敏化。然而,星形膠質(zhì)細(xì)胞EAAT2在CM病理機(jī)制中的作用以及是否為CM的潛在治療靶點(diǎn)未知。因此,本研究旨在探討EAAT2在CM中樞敏化中的作用,并探索EAAT2表達(dá)增強(qiáng)劑LDN-212320對(duì)CM大鼠的治療潛力。方法:1.將雄性Sprague-Dawley大鼠通過連續(xù)7天的硬腦膜炎性湯（inflammatory soup,IS）輸注以構(gòu)建慢性偏頭痛大鼠模型。通過測(cè)量CM大鼠機(jī)械痛閾值和熱痛閾值的變化以及三叉神經(jīng)脊束尾核部位（trigeminal nucleus caudalis,TNC）降鈣素基因相關(guān)鈦（calcitonin gene-related peptide,CGRP）蛋白水平表達(dá)的變化來評(píng)... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

反復(fù)IS/PBS輸注后大鼠痛閾值和TNC部位CGRP表達(dá)的變化

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文29圖2.大腦TNC區(qū)域示意圖Fig.2SchematicrepresentationofthebrainregionforTNC.ThewhitedottedframerepresentstheTNCregionsandthewhitesolidlinerectangularboxintheTNCareaswereselectedfortheanalysisofastrocytes.NucleiwerelabeledwithDAPI(blue),andastrocyteswerelabeledwithGFAP(red).2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差形式表示。采用GraphPadPrism7軟件生成圖形，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果以箱型圖的形式呈現(xiàn)。在進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析之前，使用Shapiro-Wilk（S-W）正態(tài)性檢驗(yàn)來檢驗(yàn)所有數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)性，并分別使用F檢驗(yàn)或Bartlett檢驗(yàn)方差齊性。使用SPSS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行Z評(píng)分檢驗(yàn)以識(shí)別異常值，Z評(píng)分<-3或>3的數(shù)據(jù)被認(rèn)為是異常值，在本研究中沒有數(shù)據(jù)被識(shí)別為異常值。行為學(xué)數(shù)據(jù)（機(jī)械痛閾值和熱痛閾值）采用雙向方差分析和Bonferroni事后檢驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估。兩組數(shù)據(jù)間的差異采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行分析，兩組以上數(shù)據(jù)采用單因素方差分析和Bonferroni事后檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較。P<0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文31圖3.EAAT2在TNC部位的表達(dá)及定位Fig.3ThelocalizationofEAAT2andtheexpressionlevelsintheTNC.a-b.EAAT2proteinexpressionintheTNCoftheCMgroupwasremarkablydecreasedcomparedtothatintheshamgroup.Proteinexpressioninthebargraphsisshownrelativetotheintensitybeta-actin/GAPDH.c.EAAT2mRNAexpressionintheTNCoftheCMgroupwasconsistentwithEAAT2proteinexpressionandwasalsosignificantlydecreased(n=6ratspergroup,*P<0.05comparedwiththeshamgroup).d.DoubleimmunofluorescencestainingofGFAP(green)withEAAT2(red)intheTNC.EAAT2wasmainlyexpressedonastrocytes(shownbyarrows)(n=3rats,5picturesperrats,scalebar=20μm).Thestatisticalanalysisresultswerepresentedinbox-plots,theboxdimensionshowsthemedianandinterquartilerange,thecenterlineshowthemedianandtheboxlimitsindicatethe25thand75thpercentilesandthewhiskersshowstheremaining50%ofthedatarange.4討論突觸間隙中低濃度的谷氨酸可確保傳入信號(hào)的正常傳輸。在我們的研究中，我們使用HPLC檢測(cè)了大鼠TNC部位中的谷氨酸濃度水平，其中，CM組大鼠谷氨酸濃度明顯高于sham組，這說明異常的谷氨酸濃度水平參與了CM的發(fā)病過程。EAAT2在清除細(xì)胞間隙谷氨酸和精確調(diào)節(jié)谷氨酸濃度方面起著至關(guān)重要的作用，q-PCR和Westernblots的結(jié)果顯示CM大鼠EAAT2mRNA和蛋白表達(dá)較sham組大鼠都顯著下調(diào)，這表明EAAT2的功能障礙可能是導(dǎo)致CM中樞敏化的關(guān)鍵因素。


本文編號(hào)：3475010