人血清白蛋白（HSA）主要由人體肝臟產生,是血漿中含量最豐富的蛋白質,其對維持機體正常功能,以及治療某些疾病具有重要作用。同時HSA還是許多疾病重要的生物指標。對于HSA檢測的方法,主要有放射免疫法、酶聯(lián)免疫吸附測定法、免疫濁度法等,很多方法往往都依賴于抗體與抗原的特異性結合,特別是應用于復雜環(huán)境或者微量檢測時,所使用的抗體更要具有穩(wěn)定、可靠的性質,才能實現(xiàn)對HSA準確、特異、靈敏的檢測。因此,獲取特異性結合HSA的單克隆抗體（mAb）或其編碼基因,以對其進行分析或者改造,對HSA檢測及相關疾病的診斷具有重要意義�？贵w可變區(qū)或全長基因信息的獲取,對于進行抗體工程和抗體功能鑒定分析至關重要。本研究開發(fā)了一個完整的工作流程,使研究人員能夠從分泌抗HSA單克隆抗體的單個雜交瘤細胞中,準確鑒定出mAb對應的全長重鏈與輕鏈免疫球蛋白（Ig）基因序列。主要內容如下:利用Smart-seq2單細胞測序技術,對雜交瘤細胞2F10進行單細胞轉錄組測序,并利用BASIC,rnaSPAdes,Igfinder等分析工具,對獲得的數(shù)據(jù)進行轉錄組拼接,經過比對和篩選,最終從中分離出了一條重鏈和一條輕鏈（HC和L... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

cDNA文庫的生物分析儀電泳圖

第二篇研究內容第二章抗HSA單克隆抗體基因的驗證及重組表達23圖1.1cDNA文庫的生物分析儀電泳圖Fig.1.1Bioanalyzerelectropherogramsofpre-amplifiedcDNAlibraries.圖1.2片段化后測序文庫的生物分析儀電泳圖Fig.1.2Bioanalyzerelectropherogramofasequencinglibraryaftertagmentation.1.3.2測序數(shù)據(jù)質控為了檢測測序數(shù)據(jù)質量，使用MultiQC[123]生成數(shù)據(jù)質量報告，此工具目的在于對于測序數(shù)據(jù)進行快速準確的質量控制。相比于量化QC指標的工具，MultiQC可以實現(xiàn)跨工具和大型樣本靈活整合，精準評估整個項目的分析結果，

第二篇研究內容第二章抗HSA單克隆抗體基因的驗證及重組表達24結果如圖1.3-1.6。如圖1.3，顯示所有數(shù)據(jù)中reads的長度分布。在該圖中，橫軸為reads的長度，縱軸為reads的數(shù)量。由于采用的是150bppaired-end測序。理論上，所有的reads長度都應落入150bp的位置。結果也很明顯，此次的測序數(shù)據(jù)中不存在較短或較長reads，在測序長度上沒有質量問題。圖1.3sequence長度分布Fig.1.3Sequencelengthdistribution如圖1.4所示，此圖中表示每條序列的整個長度上所測量GC含量，將其與GC含量的建模正態(tài)分布（綠色）進行比較。圖中橫坐標表示測序序列的GC含量（1-100%），縱軸則為對應GC含量的序列讀數(shù)，即序列的數(shù)量多少。在正常的隨機庫中，期望是GC含量大致呈正態(tài)分布，其中心峰對應于基礎基因組的總體GC含量�？梢钥吹�，在所獲得的數(shù)據(jù)中，有數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布（紅色）。首先，正態(tài)分布GC含量是根據(jù)觀察到的數(shù)據(jù)計算出來的，只于建立參考分布。不正常的分布可能表示庫受到污染或者有其他引起有偏差的因素出現(xiàn)。在樣本數(shù)據(jù)中，大部分數(shù)據(jù)屬于正常范圍，超出理論范圍的數(shù)據(jù)可能是由于，某些偏好序列的大量擴增。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]抗人血白蛋白單克隆抗體的制備及其免疫金標試紙條的研制[J]. 李莉,任林柱,逄大欣,張英,歐陽紅生.  中國衛(wèi)生檢驗雜志. 2007(11)



本文編號：3474793