miR-4458在人肝細胞癌侵襲遷移中的作用及機制研究
發(fā)布時間：2021-09-03 13:42
目的:研究miR-4458在人肝細胞癌侵襲遷移中的作用及機制。方法:（1）通過qRT-PCR技術(shù)檢測23對肝細胞癌及配對癌旁組織中miR-4458的表達情況,利用Kaplan-Meier Plotter數(shù)據(jù)庫分析miR-4458表達水平對肝細胞癌患者總體生存率的影響。（2）調(diào)控miR-4458在人肝細胞癌細胞系Hep3B和Huh7中的表達水平。通過劃痕實驗、Transwell實驗驗證miR-4458對肝細胞癌細胞侵襲遷移能力的影響,并通過Western blot檢測上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Snail的表達變化。（3）使用qRT-PCR以及Western blot等方法檢測miR-4458對靶基因及通路分子的影響。結(jié)果:（1）相較于配對癌旁組織,miR-4458在肝細胞癌組織中的表達明顯下降,低表達miR-4458提示患者生存預期較差。（2）在肝細胞癌細胞中過表達miR-4458可抑制細胞的侵襲、遷移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,去表達miR-4458可促進肝細胞癌細胞的惡性表型。（3）miR-4458能抑制TGFBR1的表達,并通過抑制TGF...
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市
【文章頁數(shù)】：43 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
miR-4458在肝細胞組織和細胞系中的表達Figure1.TheexpressionofmiR-4458inHCCtissuesandcelllines
重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文17（*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001）(A)TheexpressionofmiR-4458in23pairedHCCtissues.(B)TheexpressionofmiR-4458inLO2cellsandHCCcelllines.(C)ThesurvivalrateofHCCpatientswashigherinthehighmiR-4458levelgroupthaninthelowmiR-4458levelgroup.(*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001)2.2miR-4458抑制肝細胞癌細胞的侵襲遷移我們通過劃痕實驗和transwell實驗來評估m(xù)iR-4458對肝細胞癌細胞系侵襲遷移能力的影響。在劃痕實驗中，轉(zhuǎn)染了miR-4458mimics的Hep3B細胞細胞遷移的距離較對照組明顯縮短（圖2A），而轉(zhuǎn)染miR-4458inhibitor的Huh7細胞細胞遷移距離較對照組明顯增加（圖2C）。在transwell實驗中，轉(zhuǎn)染了miR-4458mimics的Hep3B細胞下層小室跨膜細胞數(shù)量明顯下降（圖2B），而轉(zhuǎn)染miR-4458inhibitor的Huh7細胞下層小室跨膜細胞數(shù)量明顯增多（圖2D）。圖2.miR-4458調(diào)控肝細胞癌遷移和侵襲Figure2.miR-4458regulatesHCCcellmigrationandinvasion(A,B)使用劃痕實驗和transwell實驗檢測過表達miR-4445的Hep3B細胞遷移和侵襲能力。(C,D)使用劃痕實驗和transwell實驗檢測去表達miR-4458的Huh7細胞遷移和侵襲能力。
重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文19圖3.miR-4458抑制肝細胞癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化Figure3.miR-4458inhibitstheEMTofHCCcells(A,C)通過Westernblot和細胞免疫熒光檢測Hep3B細胞中EMT標志蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Snail的表達。(B,D)通過Westernblot和細胞免疫熒光檢測Huh7細胞中EMT標志蛋白的表達。(A,C)ProteinlevelsoftheEMTmarkersE-Cadherin,N-Cadherin,Vimentin,andSnailweredetectedinHep3Bcellsbywesternblotandimmunofluorescenceassay.(B,D)Huh7cellsweretransfectedwithNCinhibitorormiR-4458inhibitor,andE-Cadherin,N-Cadherin,Vimentin,andSnailproteinlevelsweredetectedbywesternblotandimmunofluorescenceassay.2.4miR-4458靶向抑制TGFBR1的表達我們通過4個公共數(shù)據(jù)庫miRDB、TargetScan、miRWalk和DIANATOOLS預測出TGFBR1是miR-4458的潛在靶基因（圖4A）。雙熒光素酶實驗顯示miR-4458mimics可以降低野生型TGFBR1-3’UTR的熒光信號，但不能改變突變型TGFBR1-3’UTR的熒光信號（圖4B）。說明miR-4458可以與TGFBR1-3’UTR靶
本文編號：3381218
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市
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【部分圖文】：
miR-4458在肝細胞組織和細胞系中的表達Figure1.TheexpressionofmiR-4458inHCCtissuesandcelllines
重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文17（*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001）(A)TheexpressionofmiR-4458in23pairedHCCtissues.(B)TheexpressionofmiR-4458inLO2cellsandHCCcelllines.(C)ThesurvivalrateofHCCpatientswashigherinthehighmiR-4458levelgroupthaninthelowmiR-4458levelgroup.(*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001)2.2miR-4458抑制肝細胞癌細胞的侵襲遷移我們通過劃痕實驗和transwell實驗來評估m(xù)iR-4458對肝細胞癌細胞系侵襲遷移能力的影響。在劃痕實驗中，轉(zhuǎn)染了miR-4458mimics的Hep3B細胞細胞遷移的距離較對照組明顯縮短（圖2A），而轉(zhuǎn)染miR-4458inhibitor的Huh7細胞細胞遷移距離較對照組明顯增加（圖2C）。在transwell實驗中，轉(zhuǎn)染了miR-4458mimics的Hep3B細胞下層小室跨膜細胞數(shù)量明顯下降（圖2B），而轉(zhuǎn)染miR-4458inhibitor的Huh7細胞下層小室跨膜細胞數(shù)量明顯增多（圖2D）。圖2.miR-4458調(diào)控肝細胞癌遷移和侵襲Figure2.miR-4458regulatesHCCcellmigrationandinvasion(A,B)使用劃痕實驗和transwell實驗檢測過表達miR-4445的Hep3B細胞遷移和侵襲能力。(C,D)使用劃痕實驗和transwell實驗檢測去表達miR-4458的Huh7細胞遷移和侵襲能力。
重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文19圖3.miR-4458抑制肝細胞癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化Figure3.miR-4458inhibitstheEMTofHCCcells(A,C)通過Westernblot和細胞免疫熒光檢測Hep3B細胞中EMT標志蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Snail的表達。(B,D)通過Westernblot和細胞免疫熒光檢測Huh7細胞中EMT標志蛋白的表達。(A,C)ProteinlevelsoftheEMTmarkersE-Cadherin,N-Cadherin,Vimentin,andSnailweredetectedinHep3Bcellsbywesternblotandimmunofluorescenceassay.(B,D)Huh7cellsweretransfectedwithNCinhibitorormiR-4458inhibitor,andE-Cadherin,N-Cadherin,Vimentin,andSnailproteinlevelsweredetectedbywesternblotandimmunofluorescenceassay.2.4miR-4458靶向抑制TGFBR1的表達我們通過4個公共數(shù)據(jù)庫miRDB、TargetScan、miRWalk和DIANATOOLS預測出TGFBR1是miR-4458的潛在靶基因（圖4A）。雙熒光素酶實驗顯示miR-4458mimics可以降低野生型TGFBR1-3’UTR的熒光信號，但不能改變突變型TGFBR1-3’UTR的熒光信號（圖4B）。說明miR-4458可以與TGFBR1-3’UTR靶
本文編號：3381218
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