目的:本研究擬探索人腫瘤壞死因子樣配體1A（TNF-like ligand 1A,TL1A）的水平及腫瘤壞死因子超家族15（tumor necrosis factor superfamily 15,TNFSF15）基因單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism,SNP）與原發(fā)性膽汁性膽管炎（primary biliary cholangitis,PBC）發(fā)病的關(guān)系,并對(duì)關(guān)聯(lián)分析陽性的SNP位點(diǎn)進(jìn)行功能預(yù)測,以期為今后篩查PBC高危人群及發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)提供線索。方法:1、收集PBC患者和健康對(duì)照者外周靜脈血,分離血漿和血細(xì)胞,密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC）,提取基因組DNA和RNA。2、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）檢測健康對(duì)照者和PBC患者外周血血漿TL1A的水平。3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測PBC患者和健康對(duì)照者PBMC中TNFSF15基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。4、篩選目標(biāo)SNP位點(diǎn)。應(yīng)用Sanger... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

線性免疫印跡法檢測結(jié)果示意圖

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文高琪28圖（a）圖（b）注：圖（a）為ELISA檢測TL1A柱狀圖，圖（b）為TL1A的標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖2-2ELISA檢測各實(shí)驗(yàn)組血漿中TL1A結(jié)果Fig2-2TheresultsofTL1AexpressionlevelinplasmabythemethodofELISA2.3.2應(yīng)用ROC曲線評(píng)估血漿TL1A水平預(yù)測PBC的價(jià)值應(yīng)用受試者工作特征曲線（receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC）計(jì)算曲線下面積，評(píng)價(jià)血漿TL1A濃度水平預(yù)測PBC的價(jià)值。血漿TL1A濃度水平預(yù)測PBC的ROC曲線下面積為0.838，大于機(jī)會(huì)參考下面積（P<0.05），說明血漿TL1A水平對(duì)于診斷PBC具有顯著的意義且具有一定的準(zhǔn)確性，ROC曲線圖見圖2-3。圖2-3血漿TL1A水平預(yù)測PBC的ROC曲線Fig2-3TheROCcurveofPlasmaTL1AlevelpredictsofPBC2.4TNFSF15基因mRNA的相對(duì)表達(dá)2.4.1總RNA的濃度、純度及完整性

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文高琪29瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示：28S、18S和5S條帶清晰且28S和18S亮度比約為2：1，結(jié)果如圖2-4。微量核酸檢測分光光度計(jì)檢測結(jié)果顯示：所有RNA樣本的A260/A280比值在1.9~2.1，濃度在60~200ng/μl，表明RNA的純度、濃度和完整性較好。圖2-4RNA瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果Fig2-4TheresultsofagarosegelelectrophoresisofRNA2.4.2TNFSF15基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增曲線及熔解曲線擴(kuò)增曲線的CT值在15~35之間，曲線拐點(diǎn)清楚，整體平行性好。熔解曲線為一單一峰，表明反應(yīng)無特異性擴(kuò)增。結(jié)果見下圖2-5。注：圖A為TNFSF15基因和GAPDH內(nèi)參基因擴(kuò)增曲線；圖B為TNFSF15基因和GAPDH內(nèi)參基因熔解曲線。圖2-5擴(kuò)增曲線、熔解曲線Fig2-5Amplificationcurve,meltingcurve2.4.3實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果PBC組TNFSF15基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量高于健康對(duì)照組2.975倍，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），結(jié)果見表2-4和圖2-6所示。AB28S18S5SGAPDHTNFSF15TNFSF15GAPDH


本文編號(hào)：3331267