目的:課題組前期研究發(fā)現(xiàn)堿性成纖維細(xì)胞因子（Basic fibroblast growth factor,b FGF）可調(diào)控根尖牙乳頭干細(xì)胞（Stem cells from the apical papilla,SCAP）成骨/成牙本質(zhì)分化,維持SCAP分化潛能,Wnt/β-catenin信號通路和p38信號通路參與了該過程并存在相互串?dāng)_。本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上,通過轉(zhuǎn)錄組測序進(jìn)一步分析b FGF在調(diào)控SCAP成骨分化中的分子機(jī)制,為SCAP的進(jìn)一步研究和臨床應(yīng)用提供理論實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:1、采用酶消化法獲得人原代SCAP,通過有限稀釋法、克隆化傳代培養(yǎng)SCAP,免疫熒光染色檢測間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志物,并通過成骨成脂分化誘導(dǎo)進(jìn)行多向分化能力鑒定。2、將第三代SCAP細(xì)胞分為兩組:實(shí)驗(yàn)組（20ng/m L b FGF+成骨誘導(dǎo)液）,對照組（成骨誘導(dǎo)液）,分別誘導(dǎo)7天和14天,每組3個生物學(xué)重復(fù),收集各樣本的總RNA。RNA質(zhì)檢、構(gòu)建c DNA文庫、Hi Seq測序,構(gòu)建SCAP的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫。質(zhì)檢數(shù)據(jù)庫、比對基因組、基因表達(dá)水平和差異表達(dá)分析,篩選差異表達(dá)基因。以差異表達(dá)基因?yàn)閷ο?進(jìn)一步進(jìn)行... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)錄組文庫構(gòu)建的程序圖

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文孫麗英16分開來，其中能定位到基因組上的reads數(shù)量總樣本量(Totalmapped)應(yīng)大于60-70%。此部分由杭州聯(lián)川生物公司提供技術(shù)支持。數(shù)據(jù)達(dá)到質(zhì)控的要求，將被用于之后一系列數(shù)據(jù)的分析（圖2）：圖1轉(zhuǎn)錄組文庫構(gòu)建的程序圖Fig.1Theprocedurediagramfortranscriptomelibraryconstruction圖2轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析流程圖Fig.2WorkflowsforRNA-seqdataanalysis

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文孫麗英201.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)錄入SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±s）來表示，組間比較采用單因素方差分析，方差齊采用Least-SignificantDifference(LSD)檢驗(yàn)進(jìn)行分析，方差不齊采用Dunnett`sT3法進(jìn)行分析，以ɑ=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.結(jié)果2.1SCAP的獲取與來源鑒定牙根未發(fā)育完成的離體健康的根尖牙乳頭組織呈粉色，位于根尖未發(fā)育完成的根尖部，為質(zhì)地韌的纖維結(jié)締組織，易剝離；有些牙根發(fā)育不足1/2時，其根尖乳頭組織多而韌（圖3A,B）。本實(shí)驗(yàn)采用I型膠原酶解組織塊法提取原代根尖牙乳頭細(xì)胞，3天左右在顯微鏡下觀察到單個貼壁細(xì)胞，細(xì)胞體豐滿，體積較小，核位于中央，呈成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞。有時見方形、橢圓形及多角形的細(xì)胞，細(xì)胞呈巢狀或集落狀生長（圖3C,D）。圖3根尖牙乳頭干細(xì)胞的原代培養(yǎng)A,B.體外完整磨牙根尖牙乳頭組織；C,D.SCAP原代細(xì)胞分別培養(yǎng)3天和7天呈巢狀生長及生長匯合至90%(C×100；D×200)Fig.3PrimarycultureofstemcellsfromtheapicalpapillaA,BInvitrocompletemolarapicaltoothpapillatissue;C,DTheprimarycellsofSCAPshowednestgrowthat3daysand7daysrespectively,andthegrowthconfluencereached90%(C×100;D×200)原代SCAP細(xì)胞通過酶消化后記數(shù)于96孔板中，隔1天顯微鏡下觀察單個貼壁

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]牙髓干細(xì)胞干性維持的影響因素[J]. 左燕琴,于金華,閆明.  口腔生物醫(yī)學(xué). 2017(04)
[2]bFGF激活PI3K信號通路調(diào)控大鼠胚胎干細(xì)胞自我更新[J]. 林敏,李平,錢其軍.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2016(05)
[3]間充質(zhì)干細(xì)胞干性維持信號通路的研究進(jìn)展[J]. 周穎,高孟飛,朱慧勇.  吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2013(03)
[4]NFκB信號通路在炎癥根尖牙乳頭干細(xì)胞中的作用[J]. 杜鵑,杜娟,范志朋.  北京口腔醫(yī)學(xué). 2013(01)

博士論文
[1]堿性成纖維細(xì)胞因子對根尖牙乳頭干細(xì)胞生物學(xué)作用及機(jī)制研究[D]. 吳家媛.第四軍醫(yī)大學(xué) 2011

碩士論文
[1]Wnt/β-catenin信號通路和p38信號通路對bFGF維持人根尖牙乳頭干細(xì)胞干性的影響[D]. 何梅.遵義醫(yī)科大學(xué) 2019
[2]體外研究DKK1在牙囊細(xì)胞的表達(dá)及在成骨分化的作用機(jī)制[D]. 顏露.新疆醫(yī)科大學(xué) 2019
[3]骨膜素對子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞遷移、侵襲、粘附的調(diào)控及其機(jī)制研究[D]. 徐曉璇.山東大學(xué) 2015



本文編號：2932248