目的:研究急性淋巴細胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)患兒初診時骨髓標本中細胞周期檢查點激酶1(checkpoint kinase 1,Chk1)和細胞周期檢查點激酶2(checkpoint kinase 2,Chk2)的相對表達水平,分析Chk1和Chk2在兒童ALL中與臨床特征、早期療效及臨床危險度分層等指標的相關性,探討兩者在兒童ALL發(fā)病中的臨床意義。方法:選取自2017年11月至2019年11月深圳市兒童醫(yī)院血液腫瘤科收治的ALL患兒83例,其中B-ALL患兒68例,T-ALL患兒15例,同時選取12例免疫性血小板減少癥(immune thrombocytopenic purpura,ITP)作為對照組,采集病例組和對照組患兒的骨髓標本并分離提取白細胞。采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(RT-qPCR)的方法分別檢測初診病例組和對照組骨髓標本的Chk1和Chk2 mRNA相對表達水平,利用2~(-(35)(35)Ct)法分析和描述ALL患兒Chk1和Chk2相對表達水平,并對其相對表達水平與臨床指標的相關性進行分析研究。結果:1.Chk1在初診ALL總體患兒中表達水平為[1.677(0.688,2.502)],顯著高于對照組[0.273(0.159,0.512)],差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),但B-ALL與T-ALL患兒之間Chk1表達水平無統(tǒng)計學差異(P0.05)。2.Chk1表達水平在不同臨床危險度分層具有統(tǒng)計學差異(P0.05),高危組患兒表達水平最高[2.441(1.608,5.502)],中危組次之[1.953(0.749,2.447)],低危組最低[0.975(0.205,1.866)]。3.Chk1表達水平與ALL患兒年齡、初診骨髓原幼淋巴細胞比例有具有相關性(r值分別為0.243、0.269,P值均0.05)。4.Chk2在初診ALL總體患兒中表達水平為[1.395(0.746,2.536)],高于對照組[0.228(0.185,1.416)],差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),但B-ALL與T-ALL患兒中Chk2表達水平無統(tǒng)計學差異(P0.05)。5.Chk2與臨床危險度分層相關,在高危組患兒表達水平最高[2.727(1.259,3.698)],中危組次之[1.403(0.744,2.019)],低危組最低[0.833(0.715,1.948)],但僅在高危組與低危組、高危組與中危組存在統(tǒng)計學差異(P0.05)。6.ALL患兒中Chk1與Chk2表達水平變化趨勢一致,呈正相關關系(r=0.467,P0.001)。結論:1.Chk1、Chk2在兒童ALL中表達水平明顯升高。2.Chk1、Chk2的表達水平與兒童ALL臨床危險度分層有關,可能是不良預后的標志物。3.Chk1、Chk2表達失調可能在兒童ALL的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。
【學位單位】：遵義醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2020
【中圖分類】：R733.71
【部分圖文】：

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文劉繼敏19表2-5ALL患兒臨床特征與Chk1和Chk2表達的相關性Tab.2-5CorrelationbetweenclinicalfeatureofALLchildrenandChk1andChk2expressionChk1Chk2r值Pr值P性別-0.0400.7190.0550.621年齡（月）0.2430.034*0.1400.228WBC（109/L）-0.0990.382-0.0240.830HB（g/L）-0.0640.5700.0200.858PLT（109/L）-0.0670.5520.0360.752外周原幼細胞（%）0.1600.181-0.0950.429骨髓原幼細胞（%）0.2690.028*0.0750.522注：*表示P＜0.052.5兒童ALL中Chk1與Chk2相對表達水平的關系在83例ALL患兒中Chk1相對表達水平為[1.677（0.688，2.502）]，Chk2相對表達水平為[1.395（0.745，2.536）]，采用Spearman等級相關性分析，結果顯示，Chk1與Chk2表達水平之間存正相關關系（r=0.467，P0.001）（見圖2-6）。圖2-1Chk1和Chk2相對表達水平的的相關性散點圖Fig.2-1CorrelationscatterdiagramofChk1andChk2expression

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文劉繼敏202.6Chk1和Chk2基因的相對表達水平的檢測結果采用RT-qPCR的方法進行擴增，使用LightCycler480Ⅱ自帶定量分析軟件中相對定量分析法進行測定Chk1、Chk2與內參基因β-actin的相對表達水平。首先可以通過擴增曲線判斷擴增效果，圖中可以看到，擴增曲線均達平臺期，表明均為有效擴增、擴增效果良好（圖2-2、圖2-3）。圖2-2目的基因Chk1擴增曲線圖圖2-3目的基因Chk2擴增曲線圖為驗證擴增產物的特異性，對得到的擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，可見Chk1及Chk2基因的目的條帶均位于在100bp-200bp之間（圖2-4、圖2-5），據兩者引物設計可知，是所需要的目的基因，具有特異性。圖2-4目的基因Chk1擴增產物電泳圖圖2-5目的基因Chk2擴增產物電泳圖Fig.2-5ElectrophoretogramofamplificationproductoftargetgeneChk2Fig.2-4ElectrophoretogramofamplificationproductoftargetgeneChk1Fig.2-3AmplificationcurveoftargetgeneChk2Fig.2-2AmplificationcurveoftargetgeneChk1

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文劉繼敏202.6Chk1和Chk2基因的相對表達水平的檢測結果采用RT-qPCR的方法進行擴增，使用LightCycler480Ⅱ自帶定量分析軟件中相對定量分析法進行測定Chk1、Chk2與內參基因β-actin的相對表達水平。首先可以通過擴增曲線判斷擴增效果，圖中可以看到，擴增曲線均達平臺期，表明均為有效擴增、擴增效果良好（圖2-2、圖2-3）。圖2-2目的基因Chk1擴增曲線圖圖2-3目的基因Chk2擴增曲線圖為驗證擴增產物的特異性，對得到的擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，可見Chk1及Chk2基因的目的條帶均位于在100bp-200bp之間（圖2-4、圖2-5），據兩者引物設計可知，是所需要的目的基因，具有特異性。圖2-4目的基因Chk1擴增產物電泳圖圖2-5目的基因Chk2擴增產物電泳圖Fig.2-5ElectrophoretogramofamplificationproductoftargetgeneChk2Fig.2-4ElectrophoretogramofamplificationproductoftargetgeneChk1Fig.2-3AmplificationcurveoftargetgeneChk2Fig.2-2AmplificationcurveoftargetgeneChk1
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本文編號：2890544