發(fā)布時(shí)間：2018-06-29 00:25

  本文選題：左旋樟腦 + 腦缺血��； 參考：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的眾所周知,腦缺血再灌注后會(huì)造成腦部特定區(qū)域的神經(jīng)細(xì)胞損傷,然而這種損傷機(jī)制尚不清楚。前期我們課題組的實(shí)驗(yàn)研究表明,左旋樟腦能夠保護(hù)腦缺血再灌注損傷,然而,對(duì)于這種保護(hù)機(jī)制的研究還很少。有研究表明,腦缺血再灌注可能會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞突起損傷,而缺血損傷和壞死物質(zhì)的刺激會(huì)致使自噬、凋亡過度激活,使得細(xì)胞內(nèi)容物降解過多引發(fā)細(xì)胞死亡,導(dǎo)致組織器官嚴(yán)重?fù)p傷。保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞突起以及抑制凋亡與自噬過度激活可能作為一種新的缺血性腦損傷的干預(yù)靶點(diǎn),成為腦缺血再灌注基礎(chǔ)研究與潛在臨床應(yīng)用的新熱點(diǎn)。本課題主要研究左旋樟腦對(duì)腦缺血再灌注損傷的機(jī)制,初步探討左旋樟腦在腦缺血損傷中的保護(hù)作用。前期課題組有實(shí)驗(yàn)證明左旋樟腦保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞是通過抑制凋亡效應(yīng)、抑制腦缺血再灌注損傷后自噬的過度激活,其機(jī)制可能是作用于GABAA受體靶向P53影響機(jī)體。還證明部分MicroRNA通過調(diào)控其靶基因參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和功能維持,左旋樟腦、MicroRNA等可能在腦缺血再灌注后的病理生理過程中扮演著某種重要角色。實(shí)驗(yàn)方法1.運(yùn)用大鼠右側(cè)頸動(dòng)脈插線制備腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ?造模后對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能性評(píng)分。并觀察左旋樟腦作用24h能否影響腦缺血再灌注動(dòng)物模型的神經(jīng)功能性評(píng)分。再斷頭取腦,取新鮮的大鼠皮質(zhì),進(jìn)行MiroRNA基因芯片分析。依據(jù)基因芯片分析結(jié)果挑選miR-125a等作為研究對(duì)象,qRT-PCR檢測(cè)miR-125a等在左旋樟腦作用下的表達(dá)情況。2.在生物信息學(xué)軟件上預(yù)測(cè)miR-125a可能存在的相關(guān)靶點(diǎn),構(gòu)建特異性表達(dá)的rno-miR-125a-3p模擬物和抑制物,轉(zhuǎn)染進(jìn)PC12細(xì)胞,經(jīng)免疫熒光檢測(cè)觀察相關(guān)靶蛋白表達(dá)情況,與正常組、模型組相比,檢測(cè)miR-125a是否與蛋白Cadm2的表達(dá)相關(guān)。3.轉(zhuǎn)染特異性表達(dá)的rno-miR-125a-3p模擬物和抑制物以及相應(yīng)的陰性對(duì)照物進(jìn)入PC12細(xì)胞后,經(jīng)Western Blot進(jìn)行功能性驗(yàn)證;通過構(gòu)建靶基因-3' UTR區(qū)含rno-miR-125a-3p的結(jié)合位點(diǎn)的雙熒光素酶報(bào)告基因進(jìn)一步驗(yàn)證Cadm2和miR-125a的關(guān)系。4.轉(zhuǎn)染特異性表達(dá)的rno-miR-l25a-3p模擬物和抑制物以及相應(yīng)的陰性對(duì)照物至PC12細(xì)胞,經(jīng)ImagJ檢測(cè)miR-125a-3p與PC12細(xì)胞的梭形細(xì)胞比率,分化率以及平均長度之間是否存在關(guān)聯(lián)。5.rno-miR-125a-3p模擬物和抑制物以及陰性對(duì)照物轉(zhuǎn)染至PC12細(xì)胞后,無血清處理的同時(shí)加入左旋樟腦,采用Western blot法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白(caspase-3)和自噬相關(guān)蛋白(LC3、P62)表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.本實(shí)驗(yàn)在腦缺血再灌注動(dòng)物模型基礎(chǔ)上,在給藥前后進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分。結(jié)果發(fā)現(xiàn)左旋樟腦能降低腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的行為學(xué)評(píng)分。取新鮮皮質(zhì)進(jìn)行基因芯片分析,結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,模型組中miR-125a的表達(dá)升高明顯。qRT-PCR結(jié)果顯示,與模型組相比,左旋樟腦能抑制腦缺血再灌注動(dòng)物模型中的miR-125a表達(dá),且P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miR-125a的潛在靶點(diǎn)可能是Cadm2。轉(zhuǎn)染后免疫熒光測(cè)結(jié)果顯示,與對(duì)照組、模型組相比,miR-125a模擬物組中Cadm2的表達(dá)下降,抑制物組中Cadm2的表達(dá)上升(P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。3.經(jīng)Western Blot和報(bào)告基因驗(yàn)證,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與正常組以及陰性對(duì)照組比,模擬物組中的Cadm2的表達(dá)下降,抑制物組中Cadm2上升明顯且P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;報(bào)告基因驗(yàn)證驗(yàn)證的結(jié)果也與Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果相驗(yàn)證。4.ImagJ檢測(cè)PC12細(xì)胞的梭形細(xì)胞比率,分化率以及平均長度,發(fā)現(xiàn)與正常組以及陰性對(duì)照組比,miR-125a模擬物組的各指標(biāo)都受到抑制,而抑制物組中各組指標(biāo)都有上升(P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。5.rno-miR-125a-3p模擬物能抑制血清饑餓誘導(dǎo)下Cadm2和P62的表達(dá),促進(jìn)caspase-3和LC3表達(dá);而左旋樟腦和rno-miR-125a-3p抑制物能促進(jìn)血清饑餓誘導(dǎo)下Cadm2及P62的表達(dá),抑制caspase-3和LC3表達(dá),而當(dāng)左旋樟腦與rno-miR-125a-3p抑制物合用時(shí),上述結(jié)果更為明顯(P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。結(jié)論在缺血性再灌注動(dòng)物模型以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)當(dāng)中我們發(fā)現(xiàn),左旋樟腦能通過調(diào)控miR-125a靶向Cadm2對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用,是通過靶向抑制miR-125a的表達(dá),使Cadm2蛋白上調(diào)保護(hù)神經(jīng)突起。左旋樟腦能通過調(diào)控miR-125a抑制細(xì)胞凋亡和自噬保護(hù)腦缺血再灌注損傷,此研究為左旋樟腦在腦缺血的預(yù)防和治療上提供理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective To study the protective effects of L - camphor on cerebral ischemia - reperfusion injury . The results showed that L - camphor could inhibit the expression of caspase - 3 and self - autophagy - related protein ( LC3 , P62 ) in the animal model of cerebral ischemia - reperfusion .
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2080015