本文選題：囊泡運輸 + 銜接蛋白復(fù)合體�。� 參考：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：植物細胞中存在著復(fù)雜的內(nèi)膜系統(tǒng),細胞內(nèi)蛋白的分揀發(fā)生在內(nèi)吞和分泌途徑中,反式高爾基網(wǎng)絡(luò)/早期內(nèi)吞小泡(TGN/EE)是內(nèi)吞途徑和分泌途徑的交匯點。在擬南芥中,TGN/EE是一個自主和高度動態(tài)變化的細胞器,貨物蛋白到達了TGN/EE后,會在小囊泡上進行進一步的分揀。有一些會和PVC/MVB融合進入液泡降解途徑,有一些會進入分泌途徑而運輸?shù)劫|(zhì)膜上。因此,TGN/EE是內(nèi)吞途徑和分泌途徑中至關(guān)重要的貨物分揀中心。胞內(nèi)蛋白的分揀依賴于貨物蛋白自身的分揀序列和識別這一序列的分子機制。銜接蛋白(AP)復(fù)合體在識別分揀序列的過程中起著至關(guān)重要的作用。銜接蛋白復(fù)合體是異源四聚體,包括兩個大亞基(γ和β),一個中間亞基(μ)和一個小亞基(σ)。其中中間亞基主要負責(zé)貨物的識別。在擬南芥中,最近Park和Teh等人鑒定了AP1復(fù)合體的μ亞基AP1M2的功能。AP1M2之前被命名為HAPLESS13(HAP13),它的突變體hap13表現(xiàn)出雄性不育的表型。最近的研究結(jié)果表明HAP13定位在TGN上并且可以和AP1復(fù)合體別的亞基相互作用,這證明了HAP13/AP1M2確實就是AP1的μ亞基。ap1m2-1是新發(fā)現(xiàn)的HAP13/AP1M2突變體,KNOLLE的定位在突變體中出現(xiàn)了異常從而導(dǎo)致了突變體細胞分裂的異常。但是,HAP13/AP1M2是否還參與別的生物學(xué)過程還不是很清楚。本論文的主要結(jié)果和結(jié)論如下:(1)HAP13參與了細胞的形態(tài)建成。為了研究HAP13在孢子體發(fā)育中的功能,我們利用新獲得的等位突變體hap13-1(ap1m2-1)來做研究,其還有部分的轉(zhuǎn)錄本編碼前面的229個氨基酸。hap13-1表現(xiàn)出多方面生長發(fā)育的表型,植株矮小,主根變短,在土中很難完成成花轉(zhuǎn)變。葉片表皮細胞變小而且失去了七巧板狀的拼圖結(jié)構(gòu)。表皮毛分支數(shù)減少,大多數(shù)只有一個分支。根和下胚軸表皮細胞發(fā)育異常,呈現(xiàn)出鼓包狀。根毛細胞膨大或者很難起始發(fā)育。(2)HAP13參與后高爾基體的膜泡運輸。為了探究HAP13參與哪些囊泡運輸途徑,我們利用熒光染料FM4-64和BFA處理的方法檢測內(nèi)吞和囊泡運輸?shù)倪^程。在hap13-1中,我們發(fā)現(xiàn)FM4-64的內(nèi)吞明顯增加,BFA處理后,突變體中仍然有很多FM4-64存在于BFA小體以外,BFA洗脫以后,突變體中的BFA小體仍然有部分殘留。(3)HAP13參與了調(diào)控生長素信號途徑和類受體激酶信號途徑。為了進一步研究HAP13參與的囊泡運輸途徑,把HAP13可能的貨物連接上熒光蛋白,利用雜交的方法引入到突變體中,看這些貨物蛋白的亞細胞定位是否受到影響。生長素外運蛋白PIN2在質(zhì)膜上的不對稱定位受到了破壞,油菜素內(nèi)酯的受體BRI1在胞質(zhì)小囊泡中的定位明顯增加。BFA處理后,兩種蛋白在突變中都可以形成BFA小體。但是當(dāng)BFA洗脫以后,兩種蛋白在突變體中都仍然有部分殘留。(4)HAP13介導(dǎo)液泡融合的功能在進化上保守。為了進一步驗證HAP13是AP1的中間亞基,我們利用擬南芥中的HAP13來互補酵母AP1的μ亞基突變體amp1-的表型,HAP13可以互補amp1-在滲透脅迫下液泡融合異常的表型。綜上所述,擬南芥μ1銜接蛋白對于TGN/EE上的蛋白分揀起著非常重要的作用。
[Abstract]:In Arabidopsis , TGN / EE is one of the most important goods sorting centers . ( 4 ) In order to further verify the phenotype of the mu - subunit mutant amp1 - of the yeast AP1 in the arabidopsis thaliana , in order to further verify the phenotype of the mu - subunit mutant amp1 - of the yeast AP1 in the arabidopsis thaliana , in order to further verify the phenotype of the mu - subunit mutant amp1 - of the yeast AP1 in the Arabidopsis thaliana , it is possible to complement amp1 - the phenotype of the vacuolar fusion abnormal under osmotic stress . In conclusion , the Arabidopsis . mu . 1 adaptor protein plays a very important role in protein sorting on TGN / EE .
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q943.2

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本文編號：2003323