本文關(guān)鍵詞：基于適配體熒光傳感器檢測IgE的方法研究

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【摘要】：免疫球蛋白E(IgE)是一種分泌型免疫球蛋白,在人類過敏反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。一般情況下,IgE在人血清中的含量很低,然而在過敏性哮喘、過敏性皮炎或其他免疫缺陷病的病人血清內(nèi),IgE含量會升高。因此,建立簡便、快速、靈敏的IgE的檢測方法對于過敏性疾病的臨床診斷至關(guān)重要。本文結(jié)合熒光光譜分析技術(shù)和具有高特異性識別能力的核酸適配體,建立了一種基于能量共振轉(zhuǎn)移原理的熒光傳感器檢測IgE的方法。本文以花菁類熒光染料——Cy5和水溶性好的碳納米材料——氧化石墨烯(GO)分別作為熒光能量的供體和受體。當5’端標記有Cy5的IgE的適配體核酸鏈和GO同時存在時,它們之間產(chǎn)生π-π共軛堆積作用,而被穩(wěn)定地吸附在GO的表面,Cy5與GO靠近,發(fā)生能量共振轉(zhuǎn)移,Cy5的熒光被猝滅。當IgE存在時,核酸適配體與其特異性結(jié)合形成蛋白質(zhì)-適配體復(fù)合物,GO對復(fù)合物吸附能力減弱,復(fù)合物脫離GO的表面,Cy5的熒光信號得到恢復(fù)。實驗首先采用三維熒光光譜(3D-EMM)分析法對Cy5標記適配體后的熒光性質(zhì)進行了分析,確定了633 nm為激發(fā)波長(Ex),675 nm為發(fā)射波長(Em)。然后,根據(jù)熒光猝滅性能對氧化石墨烯(GO)等四種碳納米材料進行了選擇,優(yōu)化了檢測體系的pH值和離子強度(Mg2+濃度),考察了適配體和IgE的孵育溫度和時間。結(jié)果表明,GO為最佳猝滅劑,檢測體系pH值為7.4,Mg2+濃度為1 mmol/L,37℃條件下,孵育30 mmin時,熒光信號恢復(fù)的響應(yīng)值最高。在最佳的實驗條件下,對不同濃度的IgE溶液進行檢測,得到0.05-10 nmol/L的線性范圍,檢出限為0.001nmol/L。與IgE結(jié)構(gòu)相似的IgG(免疫球蛋白G)和血清中大量存在的HSA(人血清白蛋白)在高濃度時對實驗體系的響應(yīng)值很低,說明本方法具有好的選擇性和高的特異性。將本文建立的方法對血清樣品中IgE含量進行檢測,用經(jīng)典的酶聯(lián)免疫法(ELISA)對檢測結(jié)果進行驗證,兩種方法具有很好的一致性,因此說明本文方法高效、快速、靈敏,在實際臨床應(yīng)用中存在很大的潛力。
【關(guān)鍵詞】：適配體 IgE 熒光傳感 氧化石墨烯 檢測
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R446.6;O657.3
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-27
• 1.1 核酸適配體8-16
• 1.1.1 核酸適配體的篩選9
• 1.1.2 核酸適配體的特性9-10
• 1.1.3 核酸適配體與配體目標物的作用10-11
• 1.1.4 核酸適配體的應(yīng)用領(lǐng)域11-13
• 1.1.5 適配體傳感器13-16
• 1.2 熒光適配體傳感器16-21
• 1.2.1 熒光傳感器16
• 1.2.2 熒光傳感器的分類16-19
• 1.2.3 適配體熒光傳感器19-21
• 1.3 氧化石墨烯21-23
• 1.3.1 氧化石墨烯概述21-22
• 1.3.2 氧化石墨烯在熒光傳感器中的應(yīng)用22-23
• 1.4 免疫球蛋白E23-26
• 1.4.1 免疫球蛋白E的概述23-24
• 1.4.2 免疫球蛋白E檢測方法24
• 1.4.3 核酸適配體在免疫球蛋白E檢測方法的應(yīng)用與發(fā)展24-26
• 1.5 本課題研究的主要內(nèi)容26-27
• 2 材料與方法27-33
• 2.1 實驗材料27-30
• 2.1.1 化學(xué)試劑27
• 2.1.2 生物試劑27-28
• 2.1.3 實驗儀器和材料28
• 2.1.4 待測樣品28-29
• 2.1.5 主要溶液的配制29-30
• 2.2 實驗方法30-33
• 2.2.1 孵育條件30
• 2.2.2 光譜條件30
• 2.2.3 標準曲線的繪制30-31
• 2.2.4 條件的優(yōu)化31-32
• 2.2.5 樣品前處理32
• 2.2.6 方法驗證32-33
• 3 結(jié)果與討論33-48
• 3.1 實驗原理33
• 3.2 最佳激發(fā)和發(fā)射波長的確定33-36
• 3.3 Cy5與FAM的比較36-37
• 3.4 猝滅材料的選擇37-39
• 3.4.1 水體系37-38
• 3.4.2 PBS體系38-39
• 3.5 G0最佳濃度的確定39-40
• 3.6 離子強度的選擇40-42
• 3.7 pH的優(yōu)化42-43
• 3.8 溫度的選擇43-44
• 3.9 孵育時間44-45
• 3.10 標準曲線的建立45-46
• 3.11 特異性驗證46-47
• 3.12 方法驗證47-48
• 4 結(jié)論48-49
• 5 展望49-50
• 6 參考文獻50-58
• 7 碩士期間發(fā)表論文情況58-59
• 8 致謝59

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1 王巍;賈凌云;;適配體篩選方法研究進展[J];分析化學(xué);2009年03期

2 謝海燕;陳薛釵;鄧玉林;;核酸適配體及其在化學(xué)領(lǐng)域的相關(guān)應(yīng)用[J];化學(xué)進展;2007年06期

3 屈鋒;劉允;任肖敏;趙新穎;張經(jīng)華;;毛細管電泳在核酸適配體研究及核酸適配體篩選中的應(yīng)用[J];化學(xué)進展;2009年Z2期

4 趙強;樂曉春;;核酸適配體親和色譜的研究進展[J];色譜;2009年05期

5 朱靜;黃勇;蔣小平;譚鐘揚;蔣健暉;沈國勵;俞汝勤;;基于核酸適配體-質(zhì)粒DNA復(fù)合物信號放大的熒光免疫傳感技術(shù)[J];分析化學(xué);2009年11期

6 ;生物分析中的核酸適配體[J];分析化學(xué);2012年05期

7 李瑜;王源升;于斌;張靜秋;董瑞;;核酸適配體在光生化檢測中的應(yīng)用[J];廣州化工;2012年14期

8 王周平;張維瀟;;適配體及其研究進展[J];食品與生物技術(shù)學(xué)報;2013年09期

9 ;《核酸適配體手冊》[J];分析化學(xué);2013年12期

10 李曉佩;楊良嶸;黃昆;李文松;孫西同;劉會洲;;核酸適配體在生化分離及檢測領(lǐng)域中的研究進展[J];化工學(xué)報;2013年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蔡圣;劉彩云;盧建忠;;基于核酸適配體和酶循環(huán)放大的腺苷化學(xué)發(fā)光檢測[A];中國化學(xué)會第十屆全國發(fā)光分析學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

2 陳巍;趙新穎;屈鋒;;毛細管電泳法篩選蛋白質(zhì)的核酸適配體的初步研究[A];全國生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

3 楊曉娟;邴濤;梅宏成;上官棣華;;核酸適配體用于手性拆分L型和D型色氨酸[A];全國生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

4 鄭冬梅;婁新徽;;一種基于結(jié)構(gòu)開關(guān)型適配體的無標記熒光傳感法[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第9分會場摘要集[C];2012年

5 薛利云;周小明;邢達;;基于核酸適配體探針和酶輔助熒光信號擴增的等溫高靈敏度蛋白檢測方法[A];中國光學(xué)學(xué)會2011年學(xué)術(shù)大會摘要集[C];2011年

6 馬文韜;古力;屈鋒;;毛細管電泳篩選大腸桿菌適配體的初步研究[A];全國生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

7 梁好均;徐華國;鄧偉;;核酸適配體鏈構(gòu)象轉(zhuǎn)變的研究[A];2014年兩岸三地高分子液晶態(tài)與超分子有序結(jié)構(gòu)學(xué)術(shù)研討會摘要集[C];2014年

8 王曉芳;程琳;耿霞;趙強;;基于適配體修飾的磁珠和量子點熒光法檢測凝血酶[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第9分會場摘要集[C];2012年

9 汪海林;章大鵬;;單核苷水平核酸適配體與蛋白質(zhì)相互作用分析[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第9分會場摘要集[C];2012年

10 溫桂清;范燕燕;梁愛惠;蔣治良;;核酸適配體納米金共振散射光譜檢測血清中鉀離子[A];中國化學(xué)會第十五屆全國有機分析及生物分析學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 潘文;核酸適配體在醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用前景廣闊[N];中國醫(yī)藥報;2010年

2 于洋　田野;蛋白質(zhì)檢測有了新方法[N];吉林日報;2011年

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1 黃玉坤;基于核酸適配體識別-時間分辨熒光納米探針的生物毒素檢測方法研究[D];江南大學(xué);2015年

2 陳霞;功能核酸的篩選及在分析檢測中的應(yīng)用[D];武漢大學(xué);2012年

3 林雪霞;微流控芯片與可控適配體技術(shù)用于細胞代謝物分析及其相互作用的研究[D];北京化工大學(xué);2015年

4 周慶同;生物相空間中的適配體和藥物虛擬篩選[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2015年

5 郭業(yè)民;基于適配體傳感器的牛奶中抗生素殘留快速檢測技術(shù)研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 李菁菁;適配體功能化的熒光納米探針用于蛋白和細胞傳感研究[D];南京大學(xué);2012年

7 于鴿;乙丙肝病毒相互干擾及適配體在肝癌診斷及靶向治療中的作用[D];吉林大學(xué);2016年

8 王成全;基于磁控適配體傳感體系的農(nóng)產(chǎn)品中典型霉菌毒素檢測研究[D];江蘇大學(xué);2016年

9 姜紅巖;自組裝RNA適配體納米傳感器[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

10 胡波;海洋聚醚類毒素基于適配體的檢測及生物合成的探索[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張月俠;蛋白質(zhì)寡核苷酸適配體的篩選與應(yīng)用研究[D];山東師范大學(xué);2009年

2 李慧玲;BHL DNA適配體對銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)抑制作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉金釧;適配體納米金比色法靈敏度影響因素研究及其在食品安全檢測中的應(yīng)用[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 于連元;核酸適配體修飾的納米顆粒在腫瘤靶向免疫治療及靶向熱療中的應(yīng)用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

5 趙變軍;基于適配體特異性作用的乳腺癌細胞表面多種腫瘤標記物同時檢測的新方法研究[D];南京師范大學(xué);2015年

6 喬醴峰;基于核酸適配體的β-葡萄糖醛酸苷酶一步純化固定化研究及其應(yīng)用[D];石河子大學(xué);2015年

7 呂莉;基于適配體的酶聯(lián)吸光度法檢測血小板衍生生長因子-BB[D];山西大學(xué);2015年

8 陳艷霞;核酸適配體/小檗堿熒光體系的構(gòu)筑及分析應(yīng)用[D];山西大學(xué);2015年

9 呂琴;基于熒光標記適配體的熒光各向異性法檢測小分子[D];山西大學(xué);2015年

10 朱志玲;基于核酸適配體的赭曲霉毒素A SPR檢測技術(shù)研究[D];北京化工大學(xué);2015年

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