發(fā)布時間：2017-12-11 20:27

  本文關鍵詞：出芽短梗霉（UVMU3-1）漆酶活性物質(zhì)性質(zhì)分析及其降解氯酚的研究

  更多相關文章： 漆酶 液質(zhì)聯(lián)機 核磁共振色譜 氯酚類化合物

【摘要】：漆酶的全稱為對-二酚:(雙)氧氧化還原酶,有文章中也稱為多酚氧化酶酚酶,漆酚氧化酶等。漆酶作為一種重要的氧化還原酶類,來源廣泛,并且在降解酚類等有機污染物領域發(fā)揮著越來越重要的作用,并且其只需要分子氧作為共底物,水是唯一的副產(chǎn)物,因此是一種天然的環(huán)保酵素。本文以出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)無色素突變株UVMU3-1作為菌種,對其產(chǎn)生的一種小分子胞外酶類進行分析。該分子具有類似漆酶的化學性質(zhì),因此稱為漆酶活性物質(zhì)。應用各種分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定的手段,對這種胞外小分子漆酶活性物質(zhì)進行性質(zhì)分析。另外,還探究了其是否具有與漆酶相似的降解污染物的功能,以期挖掘其重要的作用和價值。試驗結(jié)果如下:(1)通過不同規(guī)格的透析袋(0-500 D、500D-1000D、1000D-2000D、2000D-3000 D)對粗酶液進行透析,確定該小分子漆酶活性物質(zhì)應小于500 D,并除去大分子物質(zhì)。隨后通過硅膠柱層析實驗,選用乙酸乙酯作為流動相,除去極性較大的物質(zhì)。(2)通過液質(zhì)聯(lián)機實驗、高分辨質(zhì)譜和核磁共振色譜鑒定出該小分子的組分為504.44,是一種三糖物質(zhì),經(jīng)過漆酶活性測定實驗和固體分離產(chǎn)物的薄層層析(TLC)實驗檢測出該小分子的物質(zhì)并不是漆酶活性物質(zhì),但是發(fā)現(xiàn)四種分子量不同的糖分子,其質(zhì)荷比 m/z 分別為 203.0、365.0、527.0、689.0。(3)研究發(fā)現(xiàn),UVMU3-1菌株的發(fā)酵罐培養(yǎng)屬于典型的微生物生長規(guī)律,即0-14 h為停滯期、14h-32h為對數(shù)期、32h-72h為穩(wěn)定期,72h之后進入衰亡期。發(fā)酵罐培養(yǎng)UVMU3-1在32 h之后進入漆酶活性物質(zhì)的積累階段,其72 h漆酶活性物質(zhì)積累量可以達到895.56 U/L。(4)普通的漆酶在降解氯酚類化合物方面具有很大的作用,本實驗利用分離純化得到的小分子漆酶活性物質(zhì)與含有2,4,6-三氯苯酚的溶液進行降解試驗,發(fā)現(xiàn)出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)無色素突變菌株UVMU3-1經(jīng)搖瓶培養(yǎng)4天后,經(jīng)過初步的分離純化,其酶活達到329.57U/L。在50℃條件下與濃度為10mg/L的2,4,6-三氯苯酚溶液共反應3天后,其降解率可以達到60.23%。該小分子的漆酶活性物質(zhì)不同于普通的漆酶,因此其反應產(chǎn)物可能也不同于普通漆酶降解氯酚類化合物的降解產(chǎn)物。本研究未檢測出該小分子的漆酶活性物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu),因此不能推測出漆酶活性物質(zhì)降解氯酚類化合物的反應機理。還需要經(jīng)過后續(xù)的試驗進行驗證,但是通過該研究確定了實驗條件及方法,為后續(xù)的研究奠定了基礎。
【學位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：X703;Q936

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本文編號：1279802