本文關(guān)鍵詞：食物過敏原膠體金免疫層析檢測試紙條的研制

  更多相關(guān)文章： 卵轉(zhuǎn)鐵蛋白 杏仁過敏原 花生過敏原 膠體金免疫層析檢測試紙條 同步檢測

【摘要】：本論文建立了單一檢測卵轉(zhuǎn)鐵蛋白、杏仁過敏原蛋白、花生過敏原蛋白的膠體金免疫層析試紙條,并在此基礎(chǔ)上建立了能夠同時檢測杏仁、花生兩種堅果過敏原蛋白的膠體金免疫層析試紙條的檢測方法。研制檢測卵轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金免疫層析試紙條,膠體金顆粒的粒徑為20 nm；金標(biāo)抗體連接的最佳pH值為8.5、最適抗體量為25μg/mL;捕獲抗體的包被濃度為1.3mg/mL,二抗、金標(biāo)抗體稀釋倍數(shù)為1：80和1：5；選擇Millipore HF135s的硝酸纖維素膜作為固相載體；標(biāo)品稀釋液為pH 8.5的PBST緩沖溶液；對NC膜采用0.01%酪蛋白、PBS稀釋作為封閉處理液,封閉1h；金標(biāo)墊0.5%Tween-20處理,檢測限為15ng/mL,與白蛋白有交叉反應(yīng),與其他過敏原蛋白無交叉反應(yīng),10 min得到檢測結(jié)果。研制檢測杏仁過敏原膠體金免疫層析試紙條,膠體金顆粒的粒徑為20 nm；金標(biāo)抗體連接的最佳pH值為9.0、最適抗體量為36μg/mL;捕獲抗體的包被濃度為1.3mg/mL,二抗、金標(biāo)抗體稀釋倍數(shù)為1：200和1：6：對NC膜采用2%的BSA、PBS稀釋作為封閉處理液,封閉1h；其他工作條件與卵轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金免疫層析試紙條方法相同,檢測限為100 ng/mL,無交叉反應(yīng),具有良好的特異性,10 min得到檢測結(jié)果。研制檢測花生過敏原膠體金免疫層析試紙條,膠體金顆粒的粒徑為20 nm；金標(biāo)抗體連接的最佳pH值為9.0、最適抗體量為25μg/mL;捕獲抗體的包被濃度為0.5mg/mL,二抗、金標(biāo)抗體稀釋倍數(shù)為1：100和1：5；其他工作條件與另外兩種膠體金免疫層析試紙條方法相同,方法檢測限為25 ng/mL,無交叉反應(yīng),具有良好的特異性,10 min得到檢測結(jié)果。研制杏仁-花生過敏原同步檢測膠體金免疫層析試紙條,其中金標(biāo)抗體封閉物BSA含量為在杏仁兔抗中添加40μL、花生兔抗中添加30μL,其余工作條件與單一檢測試紙條方法一致。方法對杏仁和花生過敏原的檢測限分別為100 ng/mL、25 ng/mL,無交叉反應(yīng),10 min得到檢測結(jié)果。本文建立的方法操作簡便快速、結(jié)果判斷容易,適用于大量樣品的快速篩選。通過對實(shí)際樣品的添加過敏原蛋白和過敏原陽性樣品的檢測,并與購買的Neogen商業(yè)化過敏原檢測試劑盒對試紙條的檢測結(jié)果的有效性進(jìn)行對比驗(yàn)證,可以檢測出過敏原標(biāo)簽指示不明的食品,有助于食物過敏原的排查。
【關(guān)鍵詞】：卵轉(zhuǎn)鐵蛋白 杏仁過敏原 花生過敏原 膠體金免疫層析檢測試紙條 同步檢測
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：TS207.3
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-17
• 1.1 食物過敏原8-13
• 1.1.1 食物過敏概述8-10
• 1.1.2 雞蛋過敏原概述10-11
• 1.1.3 杏仁過敏原概述11-12
• 1.1.4 花生過敏原概述12-13
• 1.1.5 食物過敏原檢測方法13
• 1.2 膠體金免疫層析技術(shù)概述13-16
• 1.2.1 膠體金免疫層析試紙條的種類14-15
• 1.2.2 膠體金免疫層析試紙條的檢測原理15-16
• 1.6 論文研究的目的及意義16
• 1.7 論文研究內(nèi)容16-17
• 2 材料與方法17-31
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17-20
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物17
• 2.1.2 主要藥品與試劑17-18
• 2.1.3 主要儀器與設(shè)備18-19
• 2.1.4 主要溶液的配制19-20
• 2.1.5 待測樣品20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-31
• 2.2.1 杏仁過敏原蛋白AMP的提取20
• 2.2.2 花生過敏原蛋白的提取20
• 2.2.3 過敏原蛋白抗體的制備與純化20-23
• 2.2.4 膠體金的制備及鑒定23-24
• 2.2.5 膠體金標(biāo)記抗體的制備24-25
• 2.2.6 膠體金免疫層析試紙條檢測方法的建立25-27
• 2.2.7 膠體金免疫層析試紙條的組裝27
• 2.2.8 膠體金免疫層析試紙條檢測限的確定27-29
• 2.2.9 膠體金免疫層析試紙條檢測方法的特異性29
• 2.2.10 膠體金免疫層析試紙條樣品檢測實(shí)驗(yàn)29-31
• 3 結(jié)果與討論31-58
• 3.1 卵轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金免疫層析檢測試紙條31-37
• 3.1.1 膠體金的制備及質(zhì)量鑒定31
• 3.1.2 金標(biāo)抗體的制備31-32
• 3.1.3 卵轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金免疫層析檢測試紙條工作條件的確定32-36
• 3.1.4 卵轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金免疫層析檢測試紙條檢測限的確定36-37
• 3.1.5 卵轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金免疫層析檢測試紙條特異性的測定37
• 3.2 杏仁過敏原膠體金免疫層析檢測試紙條37-44
• 3.2.1 金標(biāo)抗體的制備37-38
• 3.2.2 杏仁過敏原膠體金免疫層析檢測試紙條工作條件的確定38-40
• 3.2.3 杏仁過敏原膠體金免疫層析檢測試紙條檢測限的確定40-41
• 3.2.4 杏仁過敏原膠體金免疫層析檢測試紙條特異性的測定41-42
• 3.2.5 杏仁過敏原膠體金免疫層析檢測試紙條對實(shí)際樣品的檢測42-44
• 3.3 花生過敏原膠體金免疫層析檢測試紙條44-51
• 3.3.1 金標(biāo)抗體的制備44-45
• 3.3.2 花生過敏原膠體金免疫層析檢測試紙條工作條件的確定45-47
• 3.3.3 花生過敏原膠體金免疫層析檢測試紙條檢測限的確定47-48
• 3.3.4 花生過敏原膠體金免疫層析檢測試紙條特異性的測定48
• 3.3.5 花生過敏原膠體金免疫層析檢測試紙條對實(shí)際樣品的檢測48-51
• 3.4 杏仁-花生過敏原同步檢測膠體金免疫層析試紙條51-58
• 3.4.1 膠體金粒徑的確定51-52
• 3.4.2 金標(biāo)抗體混合物噴涂條件的確定52
• 3.4.3 金標(biāo)抗體封閉條件的確定52-53
• 3.4.4 包被捕獲抗體順序及羊抗兔二抗稀釋倍數(shù)的確定53
• 3.4.5 杏仁-花生過敏原同步檢測膠體金免疫層析試紙條檢測限的確定53-55
• 3.4.6 杏仁-花生過敏原同步檢測膠體金免疫層析試紙條特異性的確定55
• 3.4.7 杏仁-花生過敏原同步檢測膠體金免疫層析試紙條對實(shí)際樣品檢測55-58
• 4 結(jié)論58-59
• 5 展望59-60
• 6 參考文獻(xiàn)60-66
• 7 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況66-67
• 8 致謝67

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉悅;食物過敏原膠體金免疫層析檢測試紙條的研制[D];天津科技大學(xué);2015年

2 李志源;奶牛孕酮半定量檢測膠體金試紙條的研制[D];天津農(nóng)學(xué)院;2012年

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本文編號：1032366