在真核生物細胞中,mRNA的降解是基因表達的一個重要過程,它決定了mRNA在細胞質(zhì)中的豐度。無義介導(dǎo)的mRNA降解途徑（nonsense-mediated mRNA decay,NMD）就是一種耦聯(lián)翻譯的mRNA降解機制,它可以識別和降解含有提前終止密碼子（premature termination codons,PTCs）的異常轉(zhuǎn)錄本,從而避免潛在毒性截短型蛋白質(zhì)的表達。NMD途徑可以有效監(jiān)控mRNA的質(zhì)量,保障基因精準(zhǔn)表達。盡管對NMD途徑機制的研究在哺乳動物、果蠅和酵母等后生動物細胞中取得了一些進展,但關(guān)于無義mRNA的識別和降解機制仍然沒有被清楚的闡釋,還存在諸多爭議。原生動物作為一類單細胞真核生物,其NMD途徑機制得到了一些初步研究,但是相關(guān)的研究報道相對于后生動物比較匱乏。由于其進化上的特殊性和細胞結(jié)構(gòu)的簡潔性,對原生動物NMD途徑的研究有助于闡明真核生物NMD途徑的進化和分子機制。本文在對原生動物八肋游仆蟲（Euplotes octocarinatus）細胞中無義mRNA識別和降解過程中的關(guān)鍵因子進行生物信息學(xué)鑒定的基礎(chǔ)上,利用含有熒光蛋白基因的大核人工染色體,對這些關(guān)鍵... 

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 mRNA質(zhì)量監(jiān)控機制
    1.2 NMD途徑作用的底物
    1.3 參與NMD途徑的因子
        1.3.1 UPF蛋白
        1.3.2 外顯子連接復(fù)合體
        1.3.3 SMG1 復(fù)合體
        1.3.4 無義mRNA降解相關(guān)因子
    1.4 各種生物的NMD途徑模型
        1.4.1 釀酒酵母NMD途徑模型
        1.4.2 藍氏賈第蟲NMD途徑模型
        1.4.3 嗜熱四膜蟲NMD模型
        1.4.4 哺乳動物NMD模型
    1.5 八肋游仆蟲
    1.6 本研究的目的與意義
    1.7 本研究的創(chuàng)新性
第二章 八肋游仆蟲NMD途徑因子的生物信息學(xué)分析
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 實驗主要試劑
        2.2.3 實驗試劑的配制
        2.2.4 生物信息學(xué)分析
        2.2.5 重組表達質(zhì)粒的缺失突變
        2.2.6 蛋白質(zhì)體外表達與Pull-down分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 八肋游仆蟲NMD途徑相關(guān)因子的鑒定
        2.3.2 eUPF1與e UPF2 蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)預(yù)測及蛋白分子對接
        2.3.3 αA-helixe(UPF2-U1BD)結(jié)構(gòu)在e UPF1-eUPF2 復(fù)合體中的作用
    2.4 討論
第三章 八肋游仆蟲NMD通路上游因子的細胞共定位研究
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 菌株、質(zhì)粒與八肋游仆蟲大核人工染色體
        3.2.2 主要實驗試劑與引物
        3.2.3 試劑配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 八肋游仆蟲總RNA提取及合成c DNA的方法
        3.3.2 重組載體構(gòu)建
        3.3.3 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 含mCherry基因的八肋游仆大核人工染色體的構(gòu)建
        3.4.2 八肋游仆蟲大核人工染色體表達驗證
        3.4.3 NMD通路上游因子相關(guān)重組質(zhì)粒構(gòu)建
        3.4.4 核心因子UPF1與UPF2 之間的細胞定位關(guān)系
        3.4.5 EJC組分因子與UPF2 之間的共定位關(guān)系
        3.4.6 PABP在八肋游仆蟲細胞中的定位
    3.5 討論
第四章 八肋游仆蟲NMD途徑下游降解因子共定位及途徑發(fā)生的初步探究
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 菌株和質(zhì)粒
        4.2.2 實驗主要試劑
        4.2.3 試劑的配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 重組表達載體的構(gòu)建
        4.3.2 免疫熒光定位
        4.3.3 重組質(zhì)粒定點無義突變
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 NMD通路下游因子相關(guān)重組質(zhì)粒構(gòu)建
        4.4.2 人類同源DCP2 抗體能與八肋游仆蟲DCP2 蛋白質(zhì)特異結(jié)合
        4.4.3 P-body組分因子和外切體分別與UPF1 的共定位關(guān)系
        4.4.4 八肋游仆蟲NMD途徑發(fā)生的初步探究
    4.5 討論
總結(jié)與展望
參考文獻
附錄1
附錄2
附錄3
攻讀碩士期間取得的研究成果
致謝
個人簡介及聯(lián)系方式


【參考文獻】：
期刊論文
[1]藍氏賈第蟲無義mRNA的降解[J]. 呂佳,柴楊麗,周寶春,柴寶峰.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2019(02)
[2]UPF2介導(dǎo)八肋游仆蟲NMD途徑SURF和EJC的耦聯(lián)[J]. 柴楊麗,呂佳,周寶春,梁愛華,柴寶峰.  山西大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2019(03)
[3]八肋游仆蟲NMD通路的初步研究[J]. 石文鑫,王美,柴楊麗,呂佳,張志云,王剛,柴寶峰.  中國細胞生物學(xué)學(xué)報. 2018(06)
[4]SMG1-UPF1-eRF1-eRF3復(fù)合體參與賈第蟲無義介導(dǎo)的mRNA降解激活[J]. 王美,呂佳,石文鑫,柴楊麗,文建凡,張西臣,柴寶峰.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2018(05)
[5]無義mRNA降解途徑的機制與進化[J]. 柴寶峰,王美,石文鑫,柴楊麗,呂佳.  山西大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2017(03)
[6]肽鏈釋放因子和核糖體蛋白L11在八肋游仆蟲細胞中的定位[J]. 柴寶峰,李娜,王景濤,申泉,張志云,梁愛華.  生物工程學(xué)報. 2010(02)
[7]八肋游仆蟲含綠色熒光蛋白基因的大核人工染色體的構(gòu)建[J]. 李娜,柴寶峰,王景濤,梁愛華.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2009(05)
[8]P-body及其與mRNA的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)之間的關(guān)系[J]. 張義玲,郭艷合,王毅剛,劉立,錢程.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2008(08)



本文編號：3706837