發(fā)布時(shí)間：2020-12-29 05:10

　　貉細(xì)小病毒（Raccoon Dog Parvovirus,RDPV）屬于細(xì)小病毒科,細(xì)小病毒屬,通常會(huì)引起的一種急性,高接觸性傳染病,具有較高的病發(fā)率和致死率。自RDPV被發(fā)現(xiàn)以來,我國(guó)各地先后均有貉細(xì)小病毒性腸炎的報(bào)道,嚴(yán)重養(yǎng)危害貉業(yè)養(yǎng)殖的發(fā)展。目前國(guó)內(nèi)RDPV的預(yù)防主要采用犬細(xì)小病毒弱毒疫苗或水貂腸炎病毒滅活疫苗,但保護(hù)率低,免疫效果一般。因此,研制特異性針對(duì)RDPV的安全,高效疫苗勢(shì)在必行。為了利用大腸桿菌系統(tǒng)可溶性表達(dá)RDPV VP2蛋白,獲得RDPV病毒樣顆粒（Virus-like Particles,VLPs）。本研究首先根據(jù)大腸桿菌對(duì)密碼子的偏愛性,對(duì)RDPV VP2基因序列進(jìn)行優(yōu)化并合成,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-VP2,轉(zhuǎn)化E.coli ER2566感受態(tài)細(xì)胞。SDS-PAGE檢測(cè)顯示,VP2蛋白主要以包涵體形式表達(dá);為了提高VP2蛋白可溶性表達(dá),將重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-VP2與分子伴侶pTf16共同轉(zhuǎn)入E.coli ER2566感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),通過Western-Blot鑒定RDPV VP2蛋白,并對(duì)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明,RDPV VP2蛋白得... 

【文章來源】：長(zhǎng)春工業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

衣殼蛋白VP2三級(jí)結(jié)構(gòu)分子模型[24]

第3章結(jié)果22第3章結(jié)果3.1重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-VP2構(gòu)建及鑒定將成功構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-VP2經(jīng)NdeI和HindIII酶切后，進(jìn)行0.8%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。結(jié)果見圖3.1，在1760bp左右有特異性片段顯示，與RDPVVP2基因的預(yù)期大小相符。將鑒定成功的重組質(zhì)粒pET30a-VP2測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，比對(duì)結(jié)果見圖3.2，插入到載體pET30a的VP2序列與RDPVVP2基因序列一致。M.1kbDNALadder；1.重組表達(dá)質(zhì)粒的NdeI和HindIII雙酶切圖3.1重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-VP2的酶切鑒定圖3.2重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-VP2的測(cè)序結(jié)果比對(duì)M11500bp2000bp3000bp5000bp1760bp5400bp6000bp

第3章結(jié)果22第3章結(jié)果3.1重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-VP2構(gòu)建及鑒定將成功構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-VP2經(jīng)NdeI和HindIII酶切后，進(jìn)行0.8%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。結(jié)果見圖3.1，在1760bp左右有特異性片段顯示，與RDPVVP2基因的預(yù)期大小相符。將鑒定成功的重組質(zhì)粒pET30a-VP2測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，比對(duì)結(jié)果見圖3.2，插入到載體pET30a的VP2序列與RDPVVP2基因序列一致。M.1kbDNALadder；1.重組表達(dá)質(zhì)粒的NdeI和HindIII雙酶切圖3.1重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-VP2的酶切鑒定圖3.2重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-VP2的測(cè)序結(jié)果比對(duì)M11500bp2000bp3000bp5000bp1760bp5400bp6000bp


本文編號(hào)：2945073