本文關(guān)鍵詞：大腸桿菌感光雙組分系統(tǒng)的構(gòu)建

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【摘要】：雙組分系統(tǒng)是普遍存在于細(xì)菌中的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng),它主要由兩部分構(gòu)成:組氨酸激酶(HK)和反應(yīng)調(diào)控蛋白(RR),組氨酸激酶屬于跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,可以感受外界的信號(hào)并進(jìn)行自磷酸化,隨后將磷酸基團(tuán)傳遞給相應(yīng)的反應(yīng)調(diào)控蛋白R(shí)R,活化的反應(yīng)調(diào)控蛋白可以結(jié)合到相應(yīng)的啟動(dòng)子區(qū)域,啟動(dòng)下游基因的表達(dá)。不同的雙組分系統(tǒng)能夠感受不同的外界信號(hào),為了系統(tǒng)的研究細(xì)菌中的雙組分系統(tǒng),我們利用了光遺傳的技術(shù)來重構(gòu)組氨酸激酶,將感光基因Cphl的感光片段與組氨酸激酶的保守的組氨酸激酶結(jié)構(gòu)域連接起來,形成感光的融合蛋白,從而使重構(gòu)的雙組分系統(tǒng)能夠感受紅光,用光信號(hào)代替原有的信號(hào)。感光組氨酸激酶的表達(dá)是雙載體的表達(dá)系統(tǒng),實(shí)驗(yàn)中我們通過篩選得到了 8種雙組分系統(tǒng)的感光融合體系(UhpB-UhpA,PhoR-PhoB,YedV-YedW,RstB-RstA,GlrK-GlrR,CusS-CusR,PhoQ-PhoP 和 CpxA-CpxR)。為了進(jìn)一步的應(yīng)用,我們對(duì)UhpB-UhpA這組感光雙組分系統(tǒng)進(jìn)行了光頻的實(shí)驗(yàn),檢測(cè)在不同頻率的刺激下系統(tǒng)的響應(yīng)情況。得出這組感光系統(tǒng)具有對(duì)于低頻的信號(hào)有響應(yīng)對(duì)于高頻的信號(hào)無(wú)響應(yīng)的特點(diǎn),類似于低通濾波器的性質(zhì)。我們的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明了光對(duì)于研究細(xì)菌雙組分系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì),并且為將來進(jìn)一步系統(tǒng)的研究細(xì)菌雙組分系統(tǒng)奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q78

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本文編號(hào)：1302073