本文關(guān)鍵詞：恒溫下鹽酸嗎啡對絲光綠蠅幼蟲的影響及法醫(yī)學(xué)意義

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【摘要】：目的:研究絲光綠蠅(Lucilia sericata)在嗎啡(morphine)作用下的發(fā)育變化情況,探索實(shí)驗(yàn)指標(biāo)與時間的規(guī)律性變化,從而為死后間隔時間(Postmortem interval,PMI)的推斷和法醫(yī)昆蟲毒理學(xué)(forensic toxicologic entomology)提供參考依據(jù)。 方法: 在河北醫(yī)科大學(xué)校園內(nèi)以大鼠內(nèi)臟誘捕絲光綠蠅,帶回實(shí)驗(yàn)室,在培養(yǎng)箱內(nèi)連續(xù)飼養(yǎng),以第三代作為母代觀察其在嗎啡影響下的發(fā)育。本實(shí)驗(yàn)共使用家兔4只,隨機(jī)分為對照組和實(shí)驗(yàn)組。對照組家兔經(jīng)耳緣靜脈注射生理鹽水1ml/kg,實(shí)驗(yàn)組家兔經(jīng)耳緣靜脈依次注射0.5倍、1.0倍、2.0倍致死劑量的嗎啡[1,2],給藥30min后將4只家兔處死,處死方法均為重?fù)羝湔聿垦杆僦滤馈Ｈ〖彝玫募∪饨M織分別保存,對照組標(biāo)記為M0,實(shí)驗(yàn)組依照給藥濃度從小到大依次標(biāo)記為M1、M2、M3。設(shè)定生化培養(yǎng)箱溫度為28℃,相對濕度為75%,光照周期為12h:12h。用新鮮豬肝誘絲光綠蠅產(chǎn)卵,產(chǎn)卵時間記為零時,將卵塊移至家兔的肌肉組織上飼養(yǎng)。幼蟲孵出12小時后,每隔12小時留取標(biāo)本一次,每組每次留取20頭幼蟲,直至幼蟲達(dá)到離食期。將每組每次留取的10頭幼蟲用70℃熱水燙死,然后放入濃度為70%的酒精中保存;其余10頭幼蟲用蒸餾水洗凈數(shù)次,濾紙吸干,置于-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩?1頭咽骨形態(tài)學(xué)觀察及測定 從保存液中取出幼蟲標(biāo)本后,吸干表面液體,放在培養(yǎng)皿上,用大頭針在幼蟲腹部一側(cè)扎幾個小孔,放入10%的KOH溶液中消化內(nèi)部組織,24h后將幼蟲從KOH溶液中取出,放在培養(yǎng)皿上用鑷子輕輕按壓幼蟲,直至將體內(nèi)已消化的組織排出。幼蟲在清水中洗凈數(shù)遍后,在體視顯微鏡下分離出幼蟲的頭節(jié),然后將頭咽骨進(jìn)行對稱分離標(biāo)本依次用30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%的酒精中逐級脫水,最后用二甲苯透明,顯微鏡下整姿后滴加拿大樹膠封片,置于陰涼處風(fēng)干。光學(xué)顯微鏡下觀察、拍照。利用計算機(jī)圖像分析系統(tǒng)對頭咽骨的口鉤及咽骨的面積、骨化面積和平均光密度等多項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行測定。 2蛋白質(zhì)的測定 從-70℃冰箱中取出幼蟲標(biāo)本,每組每日齡幼蟲各取10頭,分別在液氮中充分研磨后加入500μl PBS(pH7.4)溶液,12000rpm離心10min,取上清即為粗提液。 取粗提液,根據(jù)Bradford比色法測定其OD值,標(biāo)準(zhǔn)曲線用0.5mg/ml牛血清蛋白制作,利用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算出樣品中蛋白質(zhì)含量。各組頭咽骨的各項(xiàng)形態(tài)學(xué)指標(biāo)、蛋白質(zhì)含量均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,各組最大值或最小值間比較應(yīng)用單因素方差分析(one way ANOVA),分析結(jié)果由SPSS16.0軟件處理得出,以P0.05為顯著性差異有統(tǒng)計學(xué)意義,應(yīng)用Excel程序作圖。 結(jié)果: 1頭咽骨形態(tài)學(xué)特征 1.1在恒定溫度下隨著幼蟲的發(fā)育,絲光綠蠅幼蟲頭咽骨的顏色變化依次為淡黃色、棕褐色、黑褐色,幾丁質(zhì)化程度不斷加強(qiáng),骨化的范圍不斷增大。絲光綠蠅幼蟲無附口骨。 1.2在M0、M1、M2、M3組中,幼蟲口鉤的面積隨時間的延長呈階段性增加,齡期更替時變化顯著,尤以二、三齡期更替時最顯著。各組幼蟲孵出12h時口鉤面積為最小,各組口鉤面積最小值之間無明顯差異(P0.05); M1、M2、M3組幼蟲口鉤面積均于48h達(dá)到最大值,M0組于60h達(dá)到最大值, 各組幼蟲口鉤面積達(dá)到最大值后,隨時間的延長基本維持不變。幼蟲口鉤的骨化面積和平均光密度的變化趨勢與口鉤面積變化趨勢相似,但骨化面積和平均光密度在一、二齡期內(nèi)的變化趨勢較口鉤面積的變化顯著。各組幼蟲孵出12h時口鉤骨化面積和平均光密度均為最小;M0、M1、M2、M3各組口鉤的骨化面積和平均光密度達(dá)到最大值的時間分別為72h、60h、48h、48h。說明隨著藥物濃度的增加幼蟲生長速度是增快的。 在供試的四組中,口鉤面積、口鉤骨化面積、口鉤平均光密度三項(xiàng)指標(biāo)各自最大值之間無明顯差異,說明鹽酸嗎啡沒有對口鉤各項(xiàng)指標(biāo)的最大值產(chǎn)生顯著影響。 1.3在M0、M1、M2、M3組中,每組幼蟲孵出12h時咽骨面積值為最小,各組最小值之間存在顯著性差異(P0.05),說明在幼蟲最初攝食的過程中藥物即對其產(chǎn)生了影響;隨著藥物濃度的增加咽骨面積也在增加。各組幼蟲咽骨面積均于48h達(dá)到最大值,各組咽骨面積M0M1M2M3,咽骨面積最大值之間存在顯著性差異(P0.05)提示鹽酸嗎啡增加了幼蟲的最大咽骨面積。 在M0、M1、M2、M3組中,每組幼蟲孵出12h時咽骨骨化面積值均為最小,并且M0M1M2M3 ,各組骨化面積最小值之間存在顯著性差異(P0.05);幼蟲咽骨骨化面積達(dá)到最大值的時間分別為120h、120h、96h、84h,說明咽骨骨化面積的發(fā)育隨藥物濃度的增加而增快,濃度越高達(dá)到最大骨化面積的時間越短;同時分析數(shù)據(jù)顯示四個組中咽骨骨化面積最大值的變化關(guān)系為:M0M1M2M3,咽骨骨化面積最大值之間存在顯著性差異(P0.05),提示鹽酸嗎啡增大了幼蟲最大骨化面積。幼蟲咽骨骨化面積的變化趨勢與咽骨平均光密度的變化趨勢相同,二者隨幼蟲發(fā)育時間的延長呈現(xiàn)持續(xù)性增加的趨勢,并一直保持到三齡結(jié)束,是推測PMI的理想指標(biāo)。 2蛋白質(zhì)含量的變化 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:蠅類幼蟲的蛋白質(zhì)含量變化呈S型,是一個連續(xù)變化的過程。一齡、二齡增長迅速,不同實(shí)驗(yàn)組蠅類幼蟲隨著發(fā)育在三齡后變化均不明顯。四個組蛋白質(zhì)含量的變化趨勢:M0=M1M2M3,且最大值之間存在顯著性差異(P0.05) ,提示隨著藥物濃度的增加使蠅幼蟲的蛋白質(zhì)含量有所增加,并且鹽酸嗎啡使蠅幼蟲的蛋白質(zhì)含量最大值有所增加。 結(jié)論: 1幼蟲口鉤的面積、平均光密度和骨化面積隨時間的延長而增加,齡期更替時變化顯著,但進(jìn)入三齡達(dá)到最大值后變化不明顯。鹽酸嗎啡對口鉤各項(xiàng)指標(biāo)的影響不明顯。 2幼蟲咽骨面積的變化趨勢與口鉤面積的變化趨勢相同。隨時間的延長咽骨骨化面積和平均光密度呈現(xiàn)持續(xù)性增加的趨勢,并一直保持到三齡結(jié)束,是推測PMI的理想指標(biāo)。 3鹽酸嗎啡增大了咽骨面積、咽骨骨化面積、咽骨平均光密度三項(xiàng)指標(biāo)的最大值;在藥物影響下,咽骨骨化面積和咽骨平均光密度的發(fā)育隨藥物濃度的增加而增快,濃度越高達(dá)到咽骨骨化面積最大值和咽骨平均光密度最大值的時間越短。 4蠅類幼蟲的蛋白質(zhì)含量變化呈S型,是一個連續(xù)變化的過程。各組蛋白質(zhì)含量在幼蟲攝食初期隨時間的延長呈增長趨勢,當(dāng)?shù)竭_(dá)最大值后變化不明顯。但各組到達(dá)最大值的時間隨著藥物濃度的增加而縮短,并且鹽酸嗎啡增大了幼蟲體內(nèi)蛋白質(zhì)含量的最大值。差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。
【關(guān)鍵詞】：法醫(yī)昆蟲學(xué) 法醫(yī)昆蟲毒理學(xué) 絲光綠蠅 死后間隔時間(PMI) 頭咽骨 骨化面積 平均光密度
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：D919
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-16
• 結(jié)果16-19
• 附圖19-33
• 附表33-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述 尸源性蠅蛆在毒物和毒品鑒定中的應(yīng)用42-50
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 致謝50-51
• 個人簡歷51
• 一、一般情況51
• 二、個人經(jīng)歷51
• 三、發(fā)表論文51
• 四、獲獎情況51

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