本文關(guān)鍵詞：5個miniSTR基因座位點復(fù)合擴(kuò)增體系的檢驗和鑒定

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【摘要】：研究背景及目的: 短串聯(lián)重復(fù)序列(Short Tandem Repeat，STR)，也叫微衛(wèi)星DNA或簡單重復(fù)序列，廣泛存在于真核生物基因組中。其核心序列為2—6bp，具有分布廣泛、片段短、易于檢測、遺傳信息含量大、遺傳多態(tài)性高等特征。STR分型技術(shù)作為第二代遺傳標(biāo)記的主要代表，已經(jīng)廣泛運(yùn)用于法醫(yī)物證領(lǐng)域，是親權(quán)鑒定、個體識別最常用、最有效的手段。尤其profilerPlus、Identifiler、powerPlexl6等商品化STR復(fù)合擴(kuò)增試劑盒及多重?zé)晒鈾z測技術(shù)的廣泛應(yīng)用，使得STR分型技術(shù)應(yīng)用達(dá)到了一個全新的高度。目前商品化的常規(guī)STR復(fù)合擴(kuò)增試劑盒STR基因座位點主要包括CODIS(combined DNA index system)系統(tǒng)的13個核心基因座位點及D2S1338、D19S433、PentaD，PentaE等常染色體STR基因座位點。其中大部分的基因座位點擴(kuò)增產(chǎn)物片段的長度都超過200bp甚至達(dá)到500bp。在復(fù)雜多變的自然環(huán)境中，尤其是潮濕、高溫、紫外線、暴曬、微生物、強(qiáng)酸等環(huán)境因素會使生物檢材中的DNA損傷，雙鏈斷裂，DNA分子長度變短。對這種降解的生物檢材進(jìn)行常規(guī)STR分型檢驗，就容易出現(xiàn)大片段STR基因座位點等位基因缺失，導(dǎo)致分型失敗。極大的限制了STR分型技術(shù)在微量、降解生物檢材中的運(yùn)用，從而導(dǎo)致一些重要的生物檢材在案件的偵破中的價值未能得到充分的體現(xiàn)，不利于案件的快速偵破。為了彌補(bǔ)常規(guī)STR檢測技術(shù)的運(yùn)用缺陷，，Bulter等在原來的STR分型技術(shù)基礎(chǔ)上，通過重新設(shè)計引物，使正反向引物盡可能移向核心重復(fù)序列，減小擴(kuò)增產(chǎn)物片段的長度，同時保持原STR基因座位點的遺傳多態(tài)性和原有的分型結(jié)果不變，2003年該項技術(shù)被正式命名為mini STR分型技術(shù)。此后，各國學(xué)者陸續(xù)開始從事mini STR的相關(guān)研究。2006年，美國AB公司研制開發(fā)出第一個minifiler商品試劑盒，但是該試劑盒只包括8個mini STR基因座位點，由于基因座位點偏少，在個體識別等運(yùn)用中存在個體識別率不足的缺點。為此，本實驗通過篩選不同染色體上的5個mini STR基因座位點，建立新的復(fù)合擴(kuò)增體系及試劑盒，作為minifiler等商品試劑盒的有效補(bǔ)充，通過與其聯(lián)合運(yùn)用，提高微量、降解生物檢材的STR基因座位點分型成功率從而達(dá)到個體識別的目的。 方法： 在前期通過篩選并建立5個mini STR基因座位點復(fù)合擴(kuò)增體系及重慶地區(qū)人群等位基因標(biāo)準(zhǔn)物的基礎(chǔ)上，參照美國DNA分析方法技術(shù)工作組(TWGDAM)的指導(dǎo)方案，對本實驗多重?zé)晒鈴?fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)進(jìn)行靈敏度、準(zhǔn)確度、遺傳穩(wěn)定性、種屬特異性、組織特異性檢驗，對不同提取方法對分型結(jié)果的影響、以及在人工組織降解模型、腐敗組織中的運(yùn)用等進(jìn)行研究。旨在評價本實驗多重?zé)晒鈴?fù)合擴(kuò)增體系在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用價值。 結(jié)果： 該復(fù)合擴(kuò)增體系的靈敏度檢測域為25pg模板DNA；該復(fù)合擴(kuò)增體系具有較高的種屬特異性和組織同一性；通過對24例實際檢案的對比研究和分析，該體系能夠有效用于個體識別和親權(quán)鑒定等實際檢案；通過對該體系的5個mini STR基因座位點的聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果與復(fù)合擴(kuò)增分型結(jié)果對比分析發(fā)現(xiàn)本復(fù)合擴(kuò)增體系分型結(jié)果是準(zhǔn)確的；通過不同DNA提取方法對同一DNA樣本的擴(kuò)增分型結(jié)果對比研究發(fā)現(xiàn)，采用不同的方法提取DNA，對本體系5個mini STR基因座位點的分型結(jié)果無影響；通過對人工組織降解模型和腐敗組織的研究發(fā)現(xiàn)，該體系對降解檢材具有較好的擴(kuò)增效果，可用于常規(guī)STR商品試劑盒復(fù)合擴(kuò)增失敗的降解檢材的分型. 結(jié)論： 本次實驗建立的5個熒光標(biāo)記mini STR基因座位點復(fù)合擴(kuò)增體系分型結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好，靈敏度高，不同DNA提取方法對miniSTR基因座位點的分型結(jié)果無影響，種屬特異性及組織同一性良好，對于分析微量、降解生物檢材DNA的分型成功率較常規(guī)STR商品試劑盒明顯提高，可用于法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域親權(quán)鑒定及個人識別，尤其對微量、降解生物檢材的DNA分型具有較高的應(yīng)用價值，為開發(fā)國產(chǎn)的miniSTR基因座位點分型試劑盒打下了良好的基礎(chǔ)，有力的推動我國miniSTR商品試劑盒的研發(fā)。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：D919

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1216032