毛細管電泳技術具有操作簡單、樣品消耗量少、分離效率高和分析速度快等優(yōu)勢,不僅是一種高效的分離分析技術,而且已經(jīng)發(fā)展成為在線酶分析和酶抑制研究的強有力工具。酶反應全程的實時在線監(jiān)測,可以實現(xiàn)酶反應動力學過程的高時間分辨精確檢測,以更準確地獲得反應機制和反應速率常數(shù),有助于更好地了解酶反應機制,從而更全面深入地認識酶在生物代謝中的功能。此外,準確、快速的在線酶抑制劑高通量篩選方法的發(fā)展,對加快酶抑制類藥物的研發(fā)以及疾病的臨床診斷亦具有重要意義。電泳媒介微分析法(EMMA)和固定化酶微反應器(IMER)是毛細管電泳酶分析技術中常用的在線分析方法。這兩種在線酶分析法的進樣方式通常為流體動力學進樣和電動進樣,無法實現(xiàn)酶反應過程中的無干擾序列進樣分析。近年來,基于快速序列進樣的毛細管電泳序列分析技術已經(jīng)發(fā)展成為在線酶分析的另一種強有力手段,以實現(xiàn)高時間分辨和高通量的酶分析在線檢測。該文從快速序列進樣的角度,綜述了近年來毛細管電泳序列分析技術在線酶分析的研究進展,并著重介紹了各種序列進樣方法及其在酶反應和酶抑制反應中的應用,包括光快門進樣、流動門進樣、毛細管對接的二維擴散進樣、流動注射進樣、液滴微流...

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【部分圖文】：

圖 2 (a)OGPB-UV-Vis毛細管電泳序列分析裝置圖,(b)Asn和 Asp標準混合溶液20次連續(xù)進樣電泳譜圖和(c)L-天冬酰胺酶催化酶反應中底物、產(chǎn)物峰隨酶催化時間的變化圖[12]

圖1(a)OGPB-LIF毛細管電泳序列分析裝置、(b)毛細管進樣端示意圖和(c)固定化胰蛋白酶酶催化反應中底物、產(chǎn)物峰隨酶催化反應時間的變化圖[11]為了克服上述問題,Chen等[11]提出了一種基于光快門進樣技術和自制的固定化酶隔離裝置聯(lián)用的在線酶分析系統(tǒng)(見圖1a和圖....

圖 1 (a)OGPB-LIF毛細管電泳序列分析裝置、(b)毛細管 進樣端示意圖和(c)固定化胰蛋白酶酶催化反應中底物、產(chǎn)物峰隨酶催化反應時間的變化圖[11]

Xu等[9]首次將光快門進樣技術與微芯片電泳法結(jié)合,應用于在線酶分析,研究測定了β-半乳糖苷酶的酶活性和競爭性酶抑制反應。在分析過程中,底物和酶先在離心管中混合,然后轉(zhuǎn)移到芯片上的儲液槽中。在反應過程中,將樣品連續(xù)引入微芯片的分離通道中,通過光快門實現(xiàn)序列進樣,進而實現(xiàn)底物和產(chǎn)物....

圖 3 (a)流動門進樣與芯片毛細管電泳聯(lián)用用于在線酶分析 示意圖和(b)谷胱甘肽還原酶催化酶反應中產(chǎn)物GSH*隨酶催化反應時間的變化圖[15]

1993年,Lemmo和Jorgenson研究組[28]提出了流動門進樣技術。該進樣方法是將兩根相距一小段間隙的毛細管同軸對齊,其中一根毛細管為引樣毛細管,另一根為分離毛細管,在兩根對接毛細管的垂直方向上連接一個流動泵,流動泵打開時,緩沖溶液被不斷引入兩根毛細管間隙,流動的緩沖溶....

圖 4 (a)二維擴散進樣毛細管電泳在線連續(xù)分析裝置圖和 (b)Ala和Glu標準混合溶液20次連續(xù)進樣的電泳譜圖[16]

Chen等[16]在2012年提出了一種基于擴散進樣實現(xiàn)CE序列分析的方法(見圖4a)。該裝置是將兩根一端磨平的毛細管同軸固定于一個樣品池中,毛細管間隔距離在1.5μm左右。CE分析時,通過周期性地控制高壓電源的開(樣品分離)、關(擴散進樣),實現(xiàn)準確的在線序列進樣和連續(xù)CE分....

本文編號：4040121