為研究斑馬魚ngly1基因的功能,我們利用序列比對、同源建模和系統(tǒng)發(fā)育分析,發(fā)現(xiàn)斑馬魚Ngly1蛋白與其哺乳動物同源物在進化上高度保守,并且其三級結(jié)構(gòu)與小鼠Ngly1十分相似。通過基因克隆獲得了斑馬魚ngly1基因的全長cDNA,轉(zhuǎn)染HEK293T細胞后觀察到分子量約98kD的GFP-Ngly1融合蛋白。通過熒光定量PCR技術(shù)對斑馬魚胚胎發(fā)育和不同組織中ngly1的表達量進行分析,結(jié)果顯示斑馬魚ngly1 mRNA在胚胎發(fā)育的全過程中都可以檢測到,包括二細胞期,24 h,48 h和72 h,并且在胚胎發(fā)育第5天時達到高峰。在成魚中,相比于其他組織,ngly1在卵巢和睪丸中高表達,在肝臟中低表達。

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圖2ngly1核酸序列的系統(tǒng)進化樹分析,

為了研究ngly1的組織分布,從健康斑馬魚的不同組織中提取總RNA,例如心臟、腮、肝臟、脾臟、腎臟、鰾、眼、腦、卵巢、睪丸、肌肉和腸等,并且通過qRT-PCR測定ngly1的轉(zhuǎn)錄水平,先前的研究提示我們應謹慎選擇內(nèi)參基因[24]。為了找到適合斑馬魚組織分布的內(nèi)參基因,通過qRT-....

本研究通過生物信息學分析鑒定了斑馬魚ngly1基因與哺乳動物的親緣關(guān)系,克隆了斑馬魚ngly1基因,并且確定了其時空表達模式。通過同源建模及結(jié)構(gòu)預測可知,Ngly1蛋白的654個氨基酸包含三個結(jié)構(gòu)域:PUG(aa20-81),TGc(aa286-341)和PAW(aa477....

圖3重組Ngly1的表達圖5胚胎發(fā)育過程中ngly1基因的時空表達

本文編號：4011608