背景:脂肪源基質(zhì)血管組分和脂肪源性干細胞在組織工程中的應(yīng)用受到越來越多科研工作者的關(guān)注。當前,分離脂肪源基質(zhì)血管組分的方法主要有酶解法和推注法,但這兩種方法都存在著不容忽視的缺點。目的:尋找一種更加高活性、安全、簡便的制備脂肪源基質(zhì)血管組分的方法。方法:以無任何處理的脂肪組織為陰性對照,酶解法為陽性對照,通過細胞量、存活率、細胞碎片、細胞活性、增殖率等指標來比較酶解法、普通推注法、改良推注法、玻璃珠破碎法(簡稱玻璃珠法)及內(nèi)置式超聲波破碎法(簡稱內(nèi)置超聲波法)的差異。酶解法及普通推注法為目前分離脂肪源基質(zhì)血管組分細胞普遍使用的方法;改良推注法是在普通推注法的基礎(chǔ)上進行改良后得到的方法;玻璃珠法是利用玻璃珠震蕩產(chǎn)生的剪切力,在脂肪顆粒中加入玻璃珠后在2 500 r/min的條件下震蕩9 min以制備基質(zhì)血管組分細胞;內(nèi)置超聲波法則是利用空化效應(yīng),在25 W的功率下對脂肪組織處理36 s以獲得基質(zhì)血管組分細胞。結(jié)果與結(jié)論:①5種方法獲得的基質(zhì)血管組分細胞的大小差異無顯著性意義(P> 0.05);②陰性對照組細胞活性最低,酶解法細胞活性最高,酶解法、玻璃珠法及內(nèi)置超聲波法的細胞活性高于...

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圖2人基質(zhì)血管組分細胞形態(tài)(×40)

將用完全培養(yǎng)液重懸的含有基質(zhì)血管組分細胞的細胞懸液進行涂布，在倒置顯微鏡下進行觀察，見圖2。將酶解法、改良推注法、玻璃珠法及內(nèi)置超聲波法收集到的基質(zhì)血管組分細胞的大小進行比較，總的細胞大小均值為5.19μm，酶解法細胞大小為(5.22±0.26)μm，改良推注法細胞大小為(5.1....

圖3各組基質(zhì)血管組分細胞存活率

見圖3。玻璃珠法細胞存活率為(75.26±1.94)%，內(nèi)置超聲波法細胞存活率為(76.25±0.98)%，而普通推注法和改良推注法細胞存活率分別為(58.34±1.15)%、(64.33±2.44)%，略低于玻璃珠法。酶解法細胞存活率均值最高且與陰性對照相差不大，為(94.24....

圖4流式細胞儀檢測細胞碎片率和活細胞率

采用流式細胞儀進行檢測，見圖4，由結(jié)果可以看到酶解法、玻璃珠法、內(nèi)置超聲波法、改良推注法、普通推注法收集到的基質(zhì)血管組分細胞中碎片比例分別為(2.35±1.48)%,(7.85±4.43)%,(10.63±4.37)%,(24.49±4.65)%,(35.51±4.23)%，酶解....

圖5各組基質(zhì)血管組分細胞碎片率

圖4流式細胞儀檢測細胞碎片率和活細胞率酶解法的細胞凋亡率極低，為(0.019±0.011)%，普通推注法的細胞凋亡率較高，為(6.87±2.56)%，改良推注法、玻璃珠法、內(nèi)置超聲波法的細胞凋亡率分別為(4.79±2.35)%,(0.051±0.032)%,(0.092±0.0....

本文編號：3947034