目的:MORC2是Microrchidia家族CW型鋅指蛋白(MORC)家族成員之一。MORC家族在進(jìn)化上高度保守,并因其在抑制轉(zhuǎn)錄、表觀遺傳調(diào)控和DNA損傷修復(fù)等方面的重要功能引起人們的廣泛關(guān)注。MORC2蛋白是一種普遍表達(dá)的蛋白,結(jié)構(gòu)上主要包含ATPase域,CW鋅指型結(jié)構(gòu)域,核定位信號(hào)和卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域四個(gè)部分,分子量約為117kD。它在染色質(zhì)重塑、DNA損傷修復(fù)和脂肪生成以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。MORC2主要定位于細(xì)胞核,但在細(xì)胞質(zhì)中也有少量分布,有研究表明MORC2在細(xì)胞質(zhì)的定位是脂質(zhì)代謝和體內(nèi)平衡的關(guān)鍵參與者,能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)中脂肪細(xì)胞分化和脂肪生成。而研究表明蛋白的核質(zhì)分布的改變往往伴隨著結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能的轉(zhuǎn)變。C2C12細(xì)胞是由C3H小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞永生化而來(lái)的細(xì)胞株,屬于小鼠的骨骼肌干細(xì)胞。該細(xì)胞具有與骨骼肌前祖細(xì)胞相同的生物學(xué)行為,且其細(xì)胞特性和形態(tài)均一,可無(wú)限傳代培養(yǎng)。C2C12細(xì)胞在2%馬血清培養(yǎng)條件下具有單向分化為肌細(xì)胞的能力,同時(shí)能夠表達(dá)MyoD、myogenin、myosin等成熟骨骼肌的多種標(biāo)志蛋白。因而在肌細(xì)胞發(fā)育分化研究中,常常把它視為實(shí)驗(yàn)...

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
1 前言
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞來(lái)源
        2.1.2 主要試劑及藥品
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 包裝慢病毒
        2.2.3 C2C12細(xì)胞感染、穩(wěn)定株篩選及鑒定
        2.2.4 C2C12細(xì)胞誘導(dǎo)分化
        2.2.5 RNA水平的檢測(cè)
        2.2.6 蛋白水平檢測(cè)
        2.2.7 細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析
        2.2.8 細(xì)胞免疫熒光
        2.2.9 流式周期法檢測(cè)細(xì)胞周期
        2.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
3 結(jié)果
    3.1 重組質(zhì)粒 Ubi-MCS-Flag-cherry-MORC2 的鑒定
    3.2 構(gòu)建 C2C12 細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)過(guò)表達(dá) MORC2 細(xì)胞系
    3.3 過(guò)表達(dá)MORC2對(duì)C2C12 細(xì)胞分化和增殖能力的影響
    3.4 MORC2對(duì)肌分化標(biāo)志物表達(dá)的影響
    3.5 MORC2 對(duì)分化抑制因子Id3 表達(dá)的影響
    3.6 在誘導(dǎo)分化過(guò)程中MORC2發(fā)生了細(xì)胞定位的改變
    3.7 在誘導(dǎo)分化過(guò)程中Id3和Myo D的細(xì)胞分布
    3.8 細(xì)胞核漿分離檢測(cè)MORC2、I對(duì)以及Myo D表達(dá)變化
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3946888