以乙酰乳酸合成酶為靶標(biāo)的除草劑具有用量少、選擇性強(qiáng)、殺草譜廣等特點(diǎn),在田間被廣泛應(yīng)用。本研究前期篩選到一株抗咪唑啉酮類除草劑"普施特"的水稻植株,并通過(guò)克隆獲得了目的基因OsALS,序列分析發(fā)現(xiàn)OsALS基因的第627位點(diǎn)發(fā)生了突變。本研究為進(jìn)一步研究突變的OsALS基因與水稻抗除草劑活性之間的關(guān)系,將OsALS構(gòu)建到了p CAMBIA1301載體上,獲得了轉(zhuǎn)OsALS基因的浮萍并進(jìn)行了轉(zhuǎn)基因浮萍對(duì)除草劑的活性分析。研究結(jié)果表明,OsALS基因中627位點(diǎn)的突變很可能是導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因浮萍對(duì)除草劑"普施特"產(chǎn)生抗性的重要原因,研究結(jié)果為水稻種質(zhì)資源和除草劑的開(kāi)發(fā)提供了重要支持。

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圖1OsALS基因過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建圖

為了研究OsALS基因?qū)Τ輨┛剐缘挠绊�，筆者使用35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)OsALS基因，使其過(guò)量表達(dá)，將其連入雙元表達(dá)載體pCAMBIA1301中獲得完整的表達(dá)盒35S:ALS:ployA，并將該雙元載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105中。使用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化浮萍，以達(dá)到在浮萍中過(guò)表達(dá)O....

圖3侵染浮萍的再生過(guò)程

按照課題組建立的遺傳轉(zhuǎn)化方法，用EHA105-pCAMBIA1301-ALS菌株對(duì)浮萍愈傷組織進(jìn)行了侵染，經(jīng)恢復(fù)和再生培養(yǎng)等過(guò)程，獲得5個(gè)再生株系，筆者對(duì)其中4個(gè)進(jìn)行了鑒定和抗性篩選。完整的再生過(guò)程如圖3所示。為獲得轉(zhuǎn)化株系，首先采用潮霉素（Hyg）進(jìn)行了抗性篩選，使用不同濃度....

圖4Hyg篩選不同株系8d時(shí)的表型

為獲得轉(zhuǎn)化株系，首先采用潮霉素（Hyg）進(jìn)行了抗性篩選，使用不同濃度的Hyg對(duì)再生植株進(jìn)行篩選，并用非轉(zhuǎn)基因浮萍（WT）作為對(duì)照。結(jié)果顯示，當(dāng)濃度為1.0mg·L-1時(shí)，WT幾乎全部死亡。隨著Hyg濃度升高，再生植株的生長(zhǎng)狀態(tài)越來(lái)越差，對(duì)Hyg的抗性越來(lái)越低，當(dāng)Hyg濃度為2.....

圖5抗性株系的基因組PCR產(chǎn)物電泳檢測(cè)結(jié)果

為進(jìn)一步對(duì)抗性株系進(jìn)行鑒定，采用了基因組PCR檢測(cè)及測(cè)序驗(yàn)證。首先，用SDS法提取野生型株系和轉(zhuǎn)基因抗性株系總基因組DNA。PCR結(jié)果顯示，4個(gè)抗性株系均有目的基因條帶，而WT株系未有擴(kuò)增條帶，結(jié)果如圖5所示，并將4個(gè)株系DNA擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)果中，錯(cuò)誤匹配點(diǎn)為克隆ALS....

本文編號(hào)：3936646