dsRNase是一種DNA/RNA非特異性堿性核酸酶,這類酶具有廣泛的底物特異性,可影響鱗翅目昆蟲的RNA干擾效率。為驗(yàn)證從家蠶消化液分離的BmdsRNase能否在家蠶體外表達(dá)并降解dsRNA,根據(jù)其功能域構(gòu)建了3個(gè)不同基因片段的表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌進(jìn)行原核表達(dá),體外誘導(dǎo)培養(yǎng)后進(jìn)行dsRNA的降解試驗(yàn)。SDS-PAGE顯示BmdsRNase的3個(gè)基因片段均能在原核系統(tǒng)中表達(dá),最適宜的蛋白質(zhì)誘導(dǎo)時(shí)間為2 h,表達(dá)產(chǎn)物主要以包涵體形式存在。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果表明,3種重組表達(dá)菌的表達(dá)產(chǎn)物均可降解dsRNA。上述結(jié)果為后續(xù)研究BmdsRNase的功能,以及鱗翅目昆蟲的RNA干擾機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 家蠶的飼養(yǎng)與解剖
    1.2 總RNA的提取和c DNA合成
    1.3 引物設(shè)計(jì)
    1.4 BmdsRNase的基因片段克隆
    1.5 表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.6 BmdsRNase蛋白的原核誘導(dǎo)表達(dá)
    1.7 ds GFP的合成
    1.8 基于dsRNA降解反應(yīng)的BmdsRNase酶活性測(cè)定
2 結(jié)果與分析
    2.1 BmdsRNase不同基因片段的克隆和鑒定
    2.2 BmdsRNase原核表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.3 BmdsRNase蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化
    2.4 BmdsRNase蛋白表達(dá)形式的鑒定
    2.5 BmdsRNase蛋白降解dsRNA能力的檢測(cè)
3 討論



本文編號(hào)：3876214